分子生物学技术(PCR)在涂阴结核病人应用.pdfVIP

分子生物学技术(PCR)在涂阴结核病人中的应用 张明科张娟令狐晓佳 【搞要】目的：探讨分子生物学技术一聚合酶链反应(PCR)在涂阴结核病人中的临床应用价 值。方法：应用分子生物学技术体外核酸扩增聚合酶链反应对我院随机抽取的l53例抗酸染色阴性的门 诊及住院病人的痰液、胸腔积液或尿液等标本进行结核杆菌的DNA检测。结果：荧光定量PCR阳性率 为17．6％。结论：荧光定量PCR技术在结核病的临床诊断上较传统方法具有高敏感性，对结核病的诊断 具有较高的临床意义，尤其是对涂片染色为阴性的结核病具有更大的诊断价值。 【关键词】结核分枝杆菌；聚合酶链反应；结核病 结核病是一个全球性的公共卫生问题，近年来疫情明显回升，据WHO报道，全世界有2000万结 核病人，每年有800万新病例，300万人死亡。在我国目前有肺结核病人600多万，每年死于结核的病人 达25万之多，呈增长趋势[1]。因此快速、准确地诊断是控制结核病的主要条件，关于结核病的实验 室诊断，近年来也开展了一些，提高了结核病的检出率。然而荧光定量PCR技术在传统方法(如涂 片、培养)即使为阴性的标本中也能检测出结核杆菌DNA的存在。现将我院应用荧光定量PCR技术检 测涂阴结核病的痰液、胸腔积液或尿液中的结核菌情况报告如下。 l材料和方法 1．1仪器与试剂：杭州博日科技有限公司的FQD一33A荧光定量PCR检测系统和深圳匹基生物工程有 限公司的结核分枝杆菌检测试剂盒。 1．2标本来源：153例涂阴的标本均来源于我院的门诊及住院病人。 1．3方法所有患者标本按《结核病诊断细菌学检查规程》进行涂片抗酸染色、镜检。荧光定量 PCR实验：标本的采集、处理、加样、核酸扩增程序完全按照试剂盒操作说明进行DNA提取，并将制 各好的DNA模板与梯度稀释后的阳性标准品一同进行扩增，扩增参数按试剂盒说明书进行设置，由电 脑自动控制并分析检测结果。 2、结果 2．1荧光定量PC嗌测结果见表1 表l：荧光定量PCR检测各类涂阴标本结果 痰液 胸腹水 气管回收液 尿液 关节腔积液 合计 85 32 18 1l 7 153 14 6 5 l l 27 16％ 19％ 28％ 9％ 14％ 17．6％ 2．2结果分析 在定量分析中，综合考虑相关系数、误差后，设置当前域值(参考值1．o左右)。 2．3结果判断 Ct值≥40：阴性结果； Ct值40：阳性结果。 2．4质量控制 阴性质控品：全部阴性；阳性质控品(包括临界阳性质控品、强阳性质控品)全部阳性；阴性质 67 控品Ct值临界阳性质控标准品Ct强阳性质控标准品Ct，则本次实验有效，否则，实验视为无效，应 检查试剂、仪器、反应条件等方面的误差。 3．统计学分析采用x2检验。 4．讨论 4．1涂片是结核病最基本的细菌学检查方法，是诊断结核病的“金标准”。它不仅可以明确结核传染 源，而且十分经济，符合我国国情。缺点①涂片敏感性低，通常需5000．10000条菌／ml才能够得到阳 性结果；由此可得：涂阴的结核病人是由涂阴培阴和涂阴培阳两部分组成，传统的确诊只有通过临床标 本培养出结核分支杆菌或正规抗结核治疗有效来确定，因而往往无法早期明确诊断。而PCR是一种 菌的临床应用上则为涂阴结核病的早期诊断提供了极大可能。②涂片特异性差，各种分支杆菌均可着 色，需要进一步鉴定是否为结核分支杆菌；而PCR只对标本中结核分支杆菌的核酸进行特异性检测， 故特异性较高。 4．2对于肺结核来说，其中的结核球和成人型原发性结核等，经常易于同肺癌的诊断相混淆。病灶 中心部位经常出现既未见TB，又未见癌细胞的坏死区．此时涂片检测常是阴性的。在这种情况下，PCR 检测就显得特别有效。另外，TB可以导致胸膜炎、腹膜炎、肾结核、脑膜炎等。涂片法尽管在诊断上 具有直接