重组人粒细胞集落刺激因子的热稳定性的研究.pdfVIP

重组人粒细胞集落刺激因子的热稳定性研究’ 董方霆廖裂11沈世杰董标粱月琴 国家生物医学分析中心100850 “】解放军总医院医学实验中心1008S3 摘要利用毛细管电泳、紫外光谱和傅立叶变化红外光谱研究了重组人粒 细胞集落刺激因子(rhG-岱F)热变性过程。研究结果表明rJ=．G-CSF在热变 性的过程中，蛋白质发生聚集，此聚集态产生的过程是不可逆的．此工作 的开展，有利于进一步计算折叠态／去折叠态甸的平衡常数，寻找有利于构 象平衡向天然态转化的因素，为重组蛋白的选择贮存条件．具有指导意义。 关键词：重组人粒细胞集落刺激因子热变性毛细管电泳紫外光谱傅 立叶变化红外光谱 热力学稳定是蛋白质的一项十分重要的性质。蛋白质高级结构的稳定 性是很难预测的． 有时常常会因为一个氨基酸的取代而发生根大的变化． 研究蛋白质的稳定性在以下几个方面具有重要的意义，可以确定天然折叠 态蛋白质存在的适宜的环境温度：可以检测由于氮基酸取代而引起的稳定 性的变化；可作为评价蛋白质的一种手段，用于监测蛋白质分离纯化过程 中以及贮存过程中蛋白质的稳定性变化． 粒细胞集落刺激因子(G-cSF)是刺激骨髓细胞集落形成的集落刺激 因子中的一种，能够特异性地刺激和调节粒细胞系统的增殖、分化、存活 和活化．研究表明，这种刺激因子对中性粒细胞减少症有一定疗效。因而 已不断应用于临床．国内已有多家厂家通过报批．目前正处于临床试用阶 段。重组蛋白的复性始终是蛋白质工程中一项非常重要的问题，直接关系 到重组蛋白的收率．为了更好地应用毛细营电泳技术研究蛋白质的交性、 复性过程。我们应用毛细管电泳分析了rhG-5CF随温度变化的过程，并用 紫外二极管阵列检测及傅里叶变换红外m)进行了监测。 蛋白质在溶液中通常会发生以下变化： 其中F为折叠态，u为去折叠志，I为中间过度态，A为聚集态，从F 至u的变化过程是可逆的，一般可在溶液中存在；从I至A一般为不可逆， 并且溶液在A态往往不存在于溶液中，聚集后从溶液中析出。 我们应用高效毛细管电泳，uV．DAD和FT．皿同时对rhG-CSF热变性 过程进行了研究。温度升高后rll0七sF并非如我们所预料的在溶液中伸 展，发生去折叠；而是受热后分子间剧烈振动并聚集在一起，变性后的蛋 白都园聚集而沉淀出来，使得溶液中的蛋白含量减少．因而， 在毛细管电 泳中不能检出的色谱蜂逐渐降低．紫外光谱及红外光谱的分析进一步支持 了这一推论．该结果解释了G．CSF放置较长时间时从溶液中析出后不易再 溶解的原因。本结果为进一步研究出O￡sF的复性及稳定性研究奠定了一 定基础， 对寻找使平衡移向F态的因素，减少A态生成具有一定的意义． 参考文献(略) of rhG-CSF The Thermal on Study Stability Biao JieLiao Shen Dung S蚓ie Fangting DongYueqinLiang ofBiomedical 100850 NationalCenter Analysis，Beijing wore Thethermal ofrhG-CSF denaturingproperties studieAbyusing andFT·IK．Themelt w罄 capillaryMectrophoresis’UVspectua point them Woreobtainedin foundand ofdifforent