小鼠小肠上皮细胞间淋巴细胞(iIEL)和脾T淋巴细胞间基因表达差异的分析和iIEL功能初步研究.pdfVIP

2002—2003北京生命科学领域联合年会 中国生物工程杂志增刊 究发现不仅脑内多巴胺明显减少，其合成所需的酪氨酸羟化酶(Tyrosine 为一种基因治疗帕金森病的重要途径。目的：利用多巴胺合成酶基因修饰成纤维细胞，检测其TH和AADC 基因表达及生化活性，从而进一步应用于PD基因治疗。 免疫组化，原位杂交方法检测目的基因的表达；细胞经裂解后进行的酶促反应，产物以高压液相色谱一电化 学(HPLC．EC)方法检测多巴胺的生成。 结果：免疫组化检测发现TH和AADC阳性细胞数占70％以上，细胞边界清楚，胞浆着色明显。原位 杂交结果表明，利用TH和AADC的正义及反义RNA探针分别进行杂交后，反义探针杂交的阳性细胞数 达80％左右，细胞的胞浆为紫蓝色，核未着色，正义探针杂交未见阳性细胞。高压液相检测发现在L厂酪氨 统计学上具有显著性差异。给予L-DOPA时，转AADC基因的细胞与未转基因的细胞比较，酶促反应产 工程改造的细胞不仅可以在细胞内表达上述两种基因而且基因表达的两种蛋白具有酶促催化功能。 结论：本研究成功的建立了TH和AADC双基因细胞表达系统，基因表达率约为70％，而且上述两种 基因工程改造细胞可以完成联合酶促动力学的功能，体外合成多巴胺，为进一步的帕金森病体内的TH和