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山茱萸采收粗加工方法的建立及其马钱素的比较测定’
王花红1郭五保2王拮之1柚
(1陕西师范大学生命科学学院,陕西省GAP工程技术研究中心西安,710062)
(2陕西省中医药研究院实验中心西安,710003)
摘要本文采用HPLC法,对不同加工方法及不同产地山茱萸中马钱素含量变化进行了系统
的研究,提出较合理的产地加工流程为:采摘一净选一清洗一水煮软化(2倍水量,80℃保
温5min)一去核一干燥(60C,连续干燥36h)。
关键词山茱萸马钱素HPLC
中药山茱萸为山茱萸科植物山茱萸(MacrocarpJumofficinale(Sieb.etZucc.)Nakai)
的干燥成熟果肉,《中国药典》亦有收载,具有补益肝肾,涩精固脱之功效。其主要化学成
分包括有机酸,五环三萜酸。环烯醚萜甙,皂甙,糅质及多糖类。现代药理学研究表明山茱
萸具有调节人体免疫功能的作用,并研究发现山茱萸总甙提取物具有明显的免疫抑制作用。
赵武述等…曾证明其总甙部分无论在体内还是体外,均能明显抑制淋巴细胞转化、淋巴因子
激活的杀伤细胞(LAK细胞)生成和体内白细胞介素2的产生,是一种免疫抑制剂。李建明
等幢1研究结果表明山茱萸总甙不同剂量均可抑制T淋巴细胞增殖,不同剂量的山茱萸总甙还
可以抑制T淋巴细胞产生IL-2。马钱素在山茱萸中含量较高,为其总甙的主要成分之一,
因此对山茱萸中马钱素的含量控制可以作为山茱萸质量评价的一个重要指标。
1仪器和材料
2690型高效液相色谱仪(包括四元泵,真空脱气
1.1实验仪器高效液相色谱仪:Waters
电子天平
甲醇为色谱纯和分柝纯,水为乐百事纯净水。
1.2试验材料山茱萸新鲜材料采集于陕西佛坪、太白、丹风及河南西峡、内乡等地,经
officinale(Sieb.et
陕西师范大学田先华教授鉴定为山茱萸科山茱萸(Macrocarpium
Zucc.)Nakai)的果实。干药材由药材原产地收集。
马钱素标准品(含量测定用,)购自Sigma公司。
2试验方法
2.1色谱条件的选择
C
色谱桂:kromosil
温,检测波长:236nm:进样量lOllL,流速lmL/min。川
2.2对照品溶液的配制精密称取马钱索对照品2.05mg置5ml容量瓶中。加30%甲醇至
‘本研究由国家。十五”科技攻关项目(2001BAT01A35)资助
Tel:86·29
..通讯作者;E-mail:zzwang@.sIlnu.edu.cn
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刻度,摇匀静置后,精密吸取lml至lOml容量瓶中,加30%甲醇至刻度,摇匀,即得浓度
为0.04104mg/ml标准储备液。
2.3超声提取时间的确定精密称取同一批山茱萸样品粗粉(40目)0.3009六份,分别
加30%甲醇至刻度线下,超声10,20,30,40,50,60min,取出,添加甲醇至刻度线,摇匀,
ul,测定峰面积。结果表明超
转移溶液至离心管中,12000rpm离心lOmin,取上清液进样10
声30min内峰面积达到稳定。
2.4样品溶液的制备采集的新鲜果实,经去核后置烘箱内,60℃干燥约36h,取出粉碎
至40目粗粉。收购的干燥药材经干燥去潮后粉碎至40目粗粉。精密称取山茱萸粗粉0.3009,
置25ml容量瓶中,加30%甲醇至刻度线下,超声处理30rain,取出,补足损失甲醇至刻度
线,摇匀溶液,转移至离心管中,12000rpm离心lOmin,取上清液进样。
3结果与分析
3.1线性关系试验精密吸取马钱素标准品储备液(0.04104mg/m1)5,10,15。20,25u1。按
上述色谱条件。分别连续进样,测定峰面积。以马钱素对照品峰面积值Y对其进样量X(ug)
1.026Ilg问呈良好的线性关系(n--5)。
L,计算
3.2精密度和重现性试验取马钱素对照品溶液,重复进样5次,每次进
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