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生命科学研究中的微量热技术 生命科学研究中的微量热技术 热力学是研究热与其它形式能量间的转换关系以及物质系统状态变化规律的科学， 热力学定律具有普遍的适用性，它可以用于研究自然界中一切物质转变与能量转换的关 系．一切化学、生命、物理等过程都与热现象息息相关，随着科学的不断发展，尤其是现代 微量热技术的发展，热化学越来越多地渗透到其它领域，从而产生了许多新兴的学科，生 物热化学就是其中很有生命力的一种． 20世纪70年代以来，生命科学成为主导学科，处于优先发展的地位，而现在解决生 命科学问题最重要的特点是多学科性的共同探索．数学、物理学、化学、医学、控制论、甚 至地质学和天文学等均在其中找到用武之地．作为近代物理化学重要研究手段的微量热 和热分析方法，在这里也起到了非常重要的作用． 微量热对于生物系统可进行静态(恒温式的)连续测定，而热分析(如DSC)可进行动 态(程序控温)跟踪扫描．这两者相辅相成，共同获取更完整的有关生物系统的热力学和 动力学的信息． 从研究的对象看，可从生态系统一生物个体一组织和器官一细胞一细胞器 一生物大分子—一生物小分子等各个不同层次和结构水平上进行研究． 从生命科学的基本研究内容看，可涉及生物的生长发育、生理生化、物质和能量代谢 过程；遗传学方面的遗传、变异、育种及有关遗传物质DNA结构和热力学性质方面的研 究． 从化学学科研究领域看，它为现代热化学中的生物热化学、生物热力学、生物热动力 学以及向生物系统非平衡热力学领域的开拓都提供了有力的工具，同时进一步促进化学 与生命科学交叉渗透和发展，形成化学生物学(包括细胞化学和化学细胞学等)新的学科 和领域． 1细胞水平上的微量热研究 生物体的代谢过程都伴随着一定的热效应，若使用具有足够灵敏的微量热计对它进 行探测，就可提供一种研究活细胞代谢过程及有关特性的新方法·量热法用于微生物研 究已有90年的历史，早在1911年Bill利用量热法研究酵母细胞对蔗糖的作用，然而只是 到近30年由于现代实验技术的发展，研制出自动化和高灵敏的微量热仪器之后，才为微 量热法在研究细胞水平上的研究奠定了基础． 1．1细菌生长热谱图的测定 第一篇综述与专题 指出：用微量热法对细菌进行鉴别是可行的，但是必须严格控制条件，即测量方法、培养 基、培养温度、接种量等才能得到具有良好重现性的热谱，根据细菌培养的生物过程可分 为停滞期、指数生长期、稳定期和衰亡期，但Boling等人测定的细菌生长热谱中常常看不 到停滞期，指数生长期也不完整．武汉大学屈松生等人在国内首次用微量热法对细菌生 长热谱图进行研究o“]，测得了更为完整的热谱．它们的停滞期、指数生长期、稳定期和衰 亡期等均十分完整，并与培养过程的各个阶段能很好的吻合．在相同的实验条件下，其热 谱具有良好的重现性，可能利用这种热谱当作“指纹图”对细菌进行鉴别，微量热法可用鉴 别细菌的变异杉}“，还可用来研究L一型细菌的生长及其返祖现象邙]．在这些热谱中还包 含有丰富的热力学和动力学信息，引起了微生物学、医学和热化学工作者的高度重视． 1．2微量热法对微生物生长动力学性质的研究 微量热法对细菌生长代谢的研究，主要是获得细菌生长热谱后，进一步根据反应动力 学的基本原理对生长热谱进行剖析，则可获得细菌生长的动力学信息．J．P．Belaich等[7] 首先从酶催化角度，得到类似酶促反应的双曲线，用双倒数法求得了最大分解速率V～和 米氏常数K。． 武汉大学生物热化学组从另一角度对细菌生长热谱进行剖析，得到了细菌生长繁殖 的生长速率常数及生长激活能o】，在细菌的指数生长期有： P。=P。exp(kt) Jn 或 P’=jn只+缸 r 从热谱的指数生长期取一系列的P t数据进行线性拟合，即可求出k值而得到细菌生 长的速率常数．谢昌礼等对大肠杆菌37℃时的生长热谱进行剖析得到了生长速率常数k 学方法测得的太肠杆菌的传代时间值G=17min01相当吻合． 进一步改变温度，分别测定细菌生长的热谱，得到不同温度下细菌生长的速率常数 k，，实验结果表明^和T的关系符合化学动力学的Arrhenius方程，即： kT