鱼类胚胎低温保存研究进展和展望.pdfVIP

2003’青岛·全国水产养殖研讨会论文集 鱼类胚胎低温保存研究进展及展望 丁福红李军 (中国科学院海洋研究所青岛266071) 摘要鱼类胚胎冷冻保存通过低温抑制细胞代谢，使生物活性物质暂时失去活力而达到长期稳定保存的目 的。这项工作对鱼类遗传育种、生物多样性保护及濒危种类保护等领域都具有重要意义。近年来科研工作者 对鲤科鱼类，鲑鳟鱼类等多种鱼类胚胎围绕适宜冷冻发育期、抗冻剂种类浓度、降温方法及解冻方法等方面 进行了大跫的尝试和筛选工作．同时通过对胚胎渗透性、低温耐受性和抗冻剂毒性耐受性的研究加强了对冷 冻损伤机：哩的深入探讨，这方面主要以斑马鱼的研究为代表。目前在-30C以上的低温区冷冻可以获得一定 比例的复活胚胎，援高成活率可选80％左右。在．196℃的深度低温区只有鲤鱼、泥鳅和真鲷获得个别冷冻后 复活的胚胎，但无法获得重复结果。本文综合近年来的～些研究成果，对鱼类胚胎低温保存的原理和方法进 行了阐述，并对未来的研究方向和前景加以了展望。 关键词鱼类胚胎低温保存低温损伤 鱼类种质资源是水产优良品种培育，养殖生产及养殖业可持续发展的重要物质基础。由于生态环境被破 坏、水质污染严重以及长期忽视鱼类种质保护及品种选育的工作．造成许多生物种群濒临灭绝，种质退化问 题也十分突出。因此，研究保护和利用好水产种质资源，建立健全种质资源保护体系无疑是渔业科技发展的 重点之一。超低温保存作为～项新兴技术．不仅促进了生物学和医学等基础学科的发展，而且在农业．畜牧 业．水产养殖业等领域都具有广阔的应用前景。通过该技术将一些优良、濒危种类胚胎长期有效保存起来建 立胚胎库，为遗传基因多样性保护提供了技术支持，使生物种质资源得到更好有效的保护．近20年来科技工 作者在鲑鳟鱼类、鲤科鱼类及少数鲷科鱼类的胚胎低温保存方面进行了大量工作．但目前仅在．30℃以上的 温度区可以获得比较稳定的冷冻成活率，在．196℃的深度低温区仅有个别次实验获得冷冻后复活的胚胎．而 且不能重复结果。可以说鱼类胚胎超低温技术还未能实现真正的突破，因此还需要对这方面的工作进行更深 入的研究和椿讨。本文对鱼类胚胎低温保存的原理．方法进行了阐述，回顾近年来的一些新的研究成果并对 未来的研究方向和前景作以展望，以期尽早实现鱼类胚胎超低温保存技术的突破。 1 低温保存原理及损伤机制 低温生物学是研究低温(O～．196℃)条件下生物的形态结构，生理生化等生命现象的变化规律，对细胞 ．组织、器官乃至整个生物体活性保存的一门新兴的边缘学科。它的基本原理是在低温下抑制细胞代谢。使 具有生物活性的物质暂时失去活力从而达到长期保存构目的。 随着对低温保存过程的研究，对冷冻损伤的认识也不断深入。细胞内部冻结产生冰晶是造成冷冻损伤的 重要因素。目前使用的抗冻剂的多为强渗透性的小分子化合物，通过抗冻剂的渗入产生渗透压的变化，使得 细胞脱水从而抑制冰晶的形成。降温的过程是一个抗冻剂渗入．细胞内水分脱出的过程。避免冰晶损伤要求 尽量慢速降温使得脱水充分．但是脱水过量会引起胞内电解质浓度的升高，引发渗透压、化学键间的作用力 等生理生化方面的影响，同时细胞失水萎缩，如果达到最小临界体积细胞膜将会破裂，造成胚胎死亡。如果 降温过帙，抗冻剂可能渗入量不足，起不到抑制冰晶形成的作用。因此需要一个晟适降温速度．生物细胞冷 却冻结过程中会经历～个过冷状态。该状态下细胞膜上的脂类物质会从液态转变为固态，同时．细胞膜的不 等收缩会导致机械性的膜破裂及膜表面结构的改变，从而导致细胞损伤。采用植冰的手段可以在一定程度上 降低这种过冷损伤。解冻处理方法也是容易造成低温损伤的关键环节。当溶液在低温下冷冻保存时冰晶结构 会随时间延长发生变化．不断生长，相似情况也发生在解冻升温过程中，所以有可能加剧渗透压改变或机械 2003’青岛·全国水产养殖研讨会论文集 作用带来的损伤。解冻过程中由于渗透压的变化细胞会吸水膨胀，产生一系列生理生化方面的影响，如果达 到蹑大临界体积会使细胞胀破。同时大多数抗冻剂(二甲亚砜、甘油、乙二．醇)在高浓度使用时，对生物细胞 都有毒性，主要发生在冻前和冻后处理阶段。所以要将降温方式，抗冻剂的毒性和渗透性、胚胎自身的特性 及解冻方式等多方面因素综合考虑．以得到解决低温损伤问题的最适方案。 2鱼类胚胎低温保存研究现状 目前对鱼类胚胎低温保存的研究主要集中在抗冻剂的