耐旱苔藓植物DNA提取及优化RAPD_ISSR反应体系的建立.pdfVIP

第 26 卷 　第 5 期 中　国　沙 　漠 Vol . 26 　No . 5 2006 年 9 月 　　　　　　　 　　　　　　 　　　　　　　　　　　　　 Sep . 2006 J OU RN AL O F D ESER T R ESEA RC H 文章编号 : 1000694X (2006) 耐旱苔藓植物 D NA 提取及优化 RAPD 、 ISSR 反应体系的建立 1 1 2 张道远 , 张元明 , 曹 同 ( 1. 中国科学院新疆生态与地理研究所 吐鲁番沙漠植物园 , 新疆 乌鲁木齐 　8300 11 ; 2 . 上海师范大学 生命与环境科学学 院 , 上海 　200234) 摘 　要 : 耐旱苔藓植物常常单个个体矮小 、生物量低 ,如何从细小的单个个体中有效提取总 DN A 是进一步开展居 ( ) 群遗传多样性研究的关键 。本研究以古尔班通古特沙漠广泛分布的刺叶墙藓 Tort ul a desertorum 为对象 ,使用快 速提取法 、2 ×C TAB 法及 DNeasy plant mini kit 试剂盒提取法等 3 种方法对刺叶墙藓单个个体的总 DN A 进行提 取 。结果表明 ,2 ×C TAB 法提取的DN A 纯度高 ,凝胶电泳显示无明显降解现象 ,适宜作为 PCR 扩增的模板 。利 用所提取的单个个体 DN A 为模板 ,建立了优化的 RA PD 、ISSR 反应体系 。 关键词 : 苔藓植物 ; 刺叶墙藓 ; DN A 提取 ; RA PD ; ISSR 反应体系 中图分类号 : Q943 文献标识码 : A 　　苔藓植物是种数仅次于种子植物的高等植物 , 个体中提取 DN A 的研究尚未见报道 。 一般生活在阴湿的地方 ,但也有一些种类具有极强 本研究用 3 种不同方法对刺叶墙藓单个个体基 的耐旱性 ,能生活在裸露的岩石和沙丘上[ 1～6 ] ,刺叶 因组 DN A 提取进行了尝试 , 比较了各种方法的提 墙藓就是其中的典型代表[ 6 ] 。 取效果 ,确定了适合的提取方法 。利用所提取的单 刺叶墙藓为变水植物 , 自然干燥状态下呈灰黑 个个体 DN A 为模板 , 建立了优化的 RA PD 、ISSR 色 ,似一层“壳”分布在沙漠表面 ,形成有重要生态意 反应体系 ,为进一步深入开展刺叶墙藓的遗传多样 义的苔藓生物结皮 。这层“壳”是由成千上万个通过 性研究奠定基础 。同时 ,为其他旱生苔藓植物基因 ( ) 营养繁殖或有性繁殖所生成的个体 shoot s 聚集在 组 DN A 提取及 PCR 反应体系建立提供参考 。 一起 ,外貌呈“斑块状”广泛分布于新疆北部古尔班 通古特沙漠的丘间低地[7 ] 。 1 　材料和方法 为了深入探讨苔藓植物参与土壤结皮的过程及 其机理这一热点问题 ,有必要首先开展刺叶墙藓遗 1. 1 　供试材料 ( ) ( ) 传多样性及其在斑块内 间 、居群内 间 遗传分化