同一猪群感染副猪嗜血杆菌血清型与ompP5基因型多样性.pdfVIP

同一猪群感染副猪嗜血杆菌血清型 和ompP5基因型多样性 陈小飞1，2 张斌1 郭定乾1 汤承1 岳华1 1.西南民族大学生命科学与技术学院 四川，成都610042.农标普瑞纳 （成都）饲料有限公司 四川，成都610052 副猪嗜血杆菌 (Haemophilusparasuis，HPS)的血清型及基因型具有复杂多样性。本研 究用 间接血凝试验对某一猪场分离的HPS进行血清分型鉴定，并对部分菌株的外膜蛋白P5基因进行克隆测序和进 化发育分析。结果显示在21头病死猪不同部位分离了41株；HPS血清5型18株(18/41，43.9％)、血清14型12株 (12/41，29.3％)、血清4型1株(1/41，2.4％)和未定型10株(10/41，24.4％)，其中5头猪同时感染两种不同血清型的 HPS。21株HPS临床分离株分属5个不同基因序列型(STA-E)，其中STA有12株(12/21)为优势基因型，相同血清型 的HPS分离株具有不同的STs型，来自同一头猪的HPS血清型和STs型也不相同。以上结果表明同一猪群感染的 HPS血清型和基因型存在明显的多样性，同一头猪感染HPS的血清型和基因型也存在多样性。本研究为进一步揭 示了猪群感染HPS的复杂性，研究该病的感染与流行机制提供了有价值的参考。 副猪嗜血杆菌；血清型；外膜蛋白P5；基因型；多样性 第三篇疾病防治 DNA聚合酶(5U／儿)、dNTPs、p～f1)18-T 酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)和新生牛血清购自上海夏蒙基因生物技术有限公司：胰蛋白胨大豆琼脂(TSA)和 胰蛋白胨大豆肉汤(TSB)购自北京奥博星生物技术有限责任公司。 1．3 HPS分离鉴定无菌采集四川某猪场疑似暴发猪革拉泽氏病的63头病死猪脑、心包积液、胸腔积 培养箱培养48h，挑取疑似菌落染色镜检，并进行纯培养，参照01iveira等(2006)的方法进行PCR鉴定。 1．4 HPS血清型鉴定参照Del 1．5 HPS no．ABKM 根据HPS29755菌株全基因组序列(accessio设计一 ompP5克隆测序 buffer dNTP 编码框序列约1200bp片段。PCR反应体系为25虬(10×PCR2．5VL，2．5mmol／L2虬，25mmol／ LMgCL2 i Escherichiacol 生物技术有限责任公司测序。 2结果 2．1 HPS分离鉴定结果 该发病猪群发病年龄为40—50日龄，临床表现以咳嗽、呼吸困难、消瘦、跋行为特征，共剖检63头病死 猪，可见严重的纤维素性胸膜炎、心包炎、腹膜炎，关节肿大并有灰白色粘液样关节液等症状。病料接种 培养48h可见灰白色半透明光滑湿润的小菌落，见图1：革兰氏染色可见具有多形性的革兰氏阴性杆菌，见图 2：PCR从分离菌株中扩增出约821bp的特异条带，见图3。 图1 HPS分离株的菌落特征 351 四川省畜牧兽医学会2012年学术年会 2D ln 7501qp 6S 图3分离株1 rRNA的PCR扩增鉴定结果 注：M为：DNAmaker DL2000：l为：}IPs参考菌株血清5型：2为