高分辨熔解曲线分析技术检测α地中海贫血常见三种点突变.pdfVIP

主生毪堕匮堂盘查垫12生!旦星箜鲞笙!塑鱼也』堕j丛型：坐!垫!：：Y!!：墅：!些§ ．短篇论著． 高分辨熔解曲线分析技术检测 Ot．地中海贫血常见三种点突变 魏明廖灿李茹李坚李东至 仅．地中海贫血(简称d．地贫)是由于a珠蛋白女44例，年龄4d～50岁，另包括3例产前诊断样 基l坷缺失(缺失型)或点突变(非缺失型)导致Ot珠本(羊水、绒毛、脐J1IL各l例)。其中，HbCs突变携 蛋白肽链合成减少或完全不合成而引起的一种溶血 带者44例，HbQS突变携带者25例，HbWS突变携 性贫m，呈常染色体隐性遗传。我国长江以南为高 带者12例。各样本基因型及对应例数详见表l。 发区，其中广两、广东和海南发病卒最高。最新的广 东省大样本分子流行病学涮查显示。Ot-地贫携带者 杂交和DNA测序鉴定。 频率约为8．53％…。我国最常她的3种缺失型突 表l 8l例a-地贫点突变携带青基闪型资料 变为一锄、．a3。7和．a4～，最常见的3种非缺失型突变 Constant 为Hb CS)、Hb Sze(Hb Spring(HbQuong Westmead(1ibWS)。这3种点突变都位 QS)和Hb 于Q：珠蛋白基冈第3外显子，由于d：珠蛋白基因 比0【．珠蛋白基因在珠蛋白合成中具有更重要的功 能，因此非缺失型d-地贫突变所引起的功能缺陷往 往比缺失型更为严重‘“。特别是当合并Qo．地贫 (即～蛆“)时，非缺失型HhH病的临床表现往往重 于缺失型HbH病。23。因此，在临床实践巾，对非缺 失型Of．．地贫的明确诊断亦十分重要。 2．健康对照者：选取2011年6月至9月广州 resolution 高分辨熔解曲线(high melting，HRM) 市妇女儿童医疗中心健康体检者14名，其中男 分析技术不受突变碱基位点与类型的局限，无需序 5名，女9名，年龄22—48岁。所有健康对照样本 列特异性探针．在PCR结束后直接运行高分辨熔解 经测序验证不含仅(a．和Q：)珠蛋白基冈点突变。 即可完成对样品的突变筛查和基闪型分析。这种方 本研究已经过广州市妇女儿章医疗中心医学伦理委 法因操作简便、结果准确，并且实现了真正的闭管操 员会批准，患者及健康埘照者均已签署知情同意书。 作而受到普遍关注。本研究将HRM分析技术应用 3．标本采集：采集受试者外周静脉血2ml至乙 于d-地贫常见3种点突变的检测，并探讨其临床应 二胺四乙酸(EDTA)抗凝管；经腹穿刺抽取羊水 用价值。 5 ml、绒毛约5mg，脐血1ml收集至EDTA抗凝管。 一、对象与方法 4．仪器与试剂：缺失型和非缺失型a．地中海贫 1．d一地贫点突变携带者：收集2008年12月至 血基因诊断试剂盒南深圳益生堂公司生产，PCR聚 2011年10月广州市妇女儿童医疗中心基因型已知 PLUS南美 合酶南美国Promega公司生产，LCGreen 的0【．地贫点突变携带者样本8l例，其巾男34例，