抗生素废水高效降解菌的筛选和特性研究.pdfVIP

第四届环境模拟与污染控制学术研讨会论文集 抗生素废水高效降解菌的筛选及特性研究 韩磊纪树兰任海燕张国俊 (北京工业大学环境与能源工程学院，北京，100022) _．)上．—L 1 日U吾 抗生素废水是一类高色度、难生物降解、对微生物有抑制作用的有机废水。目前， 国内外以好氧、厌氧组合生物工艺为主，但生物降解效果并不理想，废水实际处理率较 低。某些微生物经过驯化后可以增强对抗生素废水的降解能力，达到强化生物处理的目 的，提高生物法处理抗生素废水的效果。本研究试图从污泥中筛选出对抗生素废水有高 效降解能力的优势菌，并研究其降解特性，应用于实际生产，为抗生素类废水处理提供 一条新途径。 2实验材料和方法 2．1样品和培养基 泥样取自某制药厂污水处理站的二沉池和水解酸化池，水样取自抗生素生产厂的废 水排放口。试验用培养基为无机盐培养基和Lb营养培养基，无机盐培养基组成为每升 蒸馏水中含Na。HPO。·12H。02．Og，KH：PO。0．59，MgSO。·7H：00．059，(NH。)。SO。1．Og，酵母 7．0。 ml，pH 浸粉0．059，微量元素5 2．2菌株的富集和分离 泥样沉淀后，分别取其上清液lm1接种到装液量为100ml的三角瓶中，于30℃， 120 r／min的恒温摇床上培养，共富集培养8代。然后在平板上反复划线分离得到纯菌 株。 2．3菌株的筛选和驯化 r／min 将纯化的菌株分别接种到废水含量为30％的无机盐培养基中，在30。C、120 的恒温摇床中振荡培养2天，再逐渐提高废水含量(每次提高10％)，驯化5个周期。根 据菌株生长情况和及其对COD。，的降解率，筛选出生长好、降解率高的优势降解菌两株。 2．4菌株的观察和鉴定 对纯培养菌株的菌落特征、菌体形态和生理生化反应进行观察与鉴定，同时采用透 射电镜进行观察。 2．5生物量与COD。，测定 生物量用光密度OD600。表示，COD。，的测定用重铬酸钾法。 2．6生长与降解实验 试验采用以抗生素废水为唯一碳源的无机盐培养基，分别考察不同的pH、温度、废 r／min， 水含量以及降解时间对废水COD。，降解率的影响。在实验过程中摇床转速为120 接种量为lml，改变一个影响因素，固定其他3个条件，确定菌株生长的最佳条件。 3结果与讨论 3．1菌株的筛选和鉴定 经过分离和筛选实验，分离出两株高效降解菌，分别命名为kl和k2。菌株kl在 LB平板培养基上生长时菌落呈圆形，①l’1．5mm，白色，透明，表面光滑，湿润，高凸 mm，扁平，表面粗糙湿润，边 起，边缘光滑；革兰氏染阳性。K2的菌落呈圆形，①2、3 缘成锯齿状，革兰氏染色阳性。图l为k2电镜观察结果，呈短小杆状，有鞭毛，大小 mX(1．3。2．6)um。 约为(0。8’0．9)u 菌株kl，k2的氧化酶和接触酶都为阳性，由内生芽孢，k1厌氧，k2好氧。生理生 第四届环境模拟与污染控制学术研讨会论文集 化反应结果表明，菌株k2能利用包括葡萄糖、L一阿拉伯糖、木糖、甘露醇、酪素、柠 檬酸盐等在内的碳源，k1可以利用葡萄糖和酪素等。根据菌落特征和菌体形态并结合菌 株的生理生化特征鉴定二株菌均为芽孢菌属，k2为短小芽孢杆菌(bacillus pumilus)， k1需要进一步作16SrDNA测序来定种。 3．2菌株降解特性 3．2．1酸碱度和温度的影响 环境的酸碱度和温度会影响细胞对营养物质的吸收及生长代谢，进而改变微生物生 长状况。由k1、k2对COD。，的降解曲线可知，在pH6．5、8．5之间菌株有较高的活性， k1、k2生长所需的最佳pH值分别为8．O