结核分枝杆菌Mtb8.4真核、原核表达质粒的构建和鉴定.pdfVIP

中国人兽共患病杂志 18 ChineseJournalofZoonoses 理，现报告如下： 一、 疫情情况 患者岳久江，男，46岁，农民。家中有l匹马10月19日突然不明原因死 亡，由岳久江等三人进行宰杀，当时马体软、四蹄黑硬，血呈黑红色，肺腔内充 满黑血饼，三人将死马扒皮、分割，把120余斤马肉、马头、马皮卖至附近村民， 剩余马肉由2家lO人食用。 患者于10月21日左面部出现一丘疹，无痛发痒，伴发热，23日右侧颈部 又出现一丘疹，同时伴有腹泻。28日晚因左颌下淋巴结肿大，面部丘疹为 2cmX2cm并破溃，疼痛难忍，29日早8时去辽宁中医附属医院外科诊治，门诊 以“带状疱疹、面部、颈部蜂窝组织炎”收入病房。入院后，每天静滴头孢三代 1．259治疗，不见好转，经耳鼻喉科、皮肤科会诊，疑为“皮肤炭疽”病例，遂 疫情上报。后经省卫生厅、省疾控中心专家会诊为“疑似炭疽”病例，派专车专 人送传染病院隔离治疗，经市传染病院专家会诊，临床诊断为“皮肤炭疽、肠炭 疽、脑膜炭疽”，患者因病情发展迅猛，经抢救无效死亡。 二、调查处理及控制措施 l、 立即进行疫情核实，并采集患者颈部患处分泌物、血样、便样，进行细 菌学鉴定。 2、依据《传染病防治法》第二十八条处理规定，对患者尸体进行消毒处理 后立即火化。对市传染病院隔离病房进行终未消毒，72小时后方可接诊。 。3、经流行病学调查，确定105户为疫点，进行彻底的终未消毒；密切接触(屠 宰、食肉)者512人，进行预防投药；一般接触者140人，接种炭疽疫苗。并对 密切接触者进行抽样调查，采集血、便标本20份，采集外环境标本38份，进行 病原检测。 4、实行疫情零报告制度，对疫区疫点内人员每天随访2次。 5、将该起疫情情况向畜牧部门通报，共同调查病原来源，会同动检站，追 查马皮下落。 6、通过医学观察和终未消毒，血、便、疫点外环境标本病原学检测均为阴 性，最长潜伏期内疫点无续发病例发生，疫情解除。 结核分枝杆菌Mtb8．4真核、原核表达质粒的构建与鉴定 李博 蔡宏 朱玉贤 1008 北京大学蛋白质工程及植物基因工程国家重点实验室 (北京 71) 根据世界卫生组织的报告，结核病已经成为威胁人类健康的最大杀手，因此， 对于结核病的预防和治疗再次成为人们关注的焦点。传统的卡介苗(Bacmus 免疫缺陷患者。人们致力于开发新型疫苗以代替传统的BCG疫苗，其中DNA 疫苗性能稳定，能诱导全面的免疫应答，且制备过程简单，在结核病疫苗研制中 中国人兽共患病杂志 ChineseJournaI ofZoonoses 19 占据重要地位。 结核杆菌全基因组的成功破译为寻找DNA疫苗的候选基因提供了强有力的 遗传学基础。研究多从具有强免疫原性的抗原入手得到编码此抗原的基因，进一 步用于DNA疫苗的制备。由于结核分枝杆菌菌液提取物能诱导机体产生对结核 分枝杆菌的保护性免疫反应，分离并研究这些具有不同的免疫原性和保护效果的 蛋白质成分的工作已引起了广泛重视。其中Mtb8．4是从结核杆菌H37Rv株培 养滤液(CF)中纯化分离出的一种低分子量蛋白抗原，可诱导强烈的体液免疫反应 和细胞免疫反应，并且在结核病致病菌株中特异性表达，有望成为结核病DNA 疫苗的候选抗原。本文构建了Mtb8．4的两种原核表达质粒和一种真核表达质 粒，为进一步研究其免疫保护效果及制备DNA疫苗奠定了基础。 我们以结核分枝杆菌标准菌株H37Rv基因组DNA为模板，PCR扩增目 的基因Mtb8．4，扩增产物酶切后分别克隆到真核表达载体pJW4303和原核表 5b中，构成重组真核表达载体pJW—Mtb8．4和 达载体pET-22b(+)以及pET