冷却和低温保存对小麦酯酶活性的影响.pdfVIP

中国工程热物理学会 传热传质学 2002年学术会议 编号：023118 冷却与低温保存对小麦酯酶活性的影响 肖建军华泽钊 陈儿同王仲海 (上海理工大学制冷与低温技术研究所，上海，20093) l：x (Tel：021E-mai JJxy@citiz．net) 摘要：为研究小麦酯酶作为检测农药残留量生物传感器的生物敏感元件的可行性，研究r小麦酯酶 在室温(20C)和4C保存时、在经历低温后及在液氮中保存后酶活性的变化情况。将小麦酶液与 低温保护剂溶液混合．直接投入液氮．解冻后采用分光光度法榆测酶活性。研究显示，小麦酯酶订! 室温(20℃)和4C保存时．其活性衰退较快，有必要对芤进行低温保存；在液氯中停留20min或 保存34h后．小麦酶活性仍能维持很高：在液氮中保存8天，小麦酶的活性仍有97．5％。 关键词：农药检测， 小麦酯酶， 低温保存 1．引言 农药残留对食品的污染已引起世界各国的重视…。据调查，我国蔬菜农药残留十 分严重，严重地区农药残留超标率达94％。为了开发在现场使用的监测系统，我们正 在研究农药残留酶生物传感器，在研究中发现小麦豫麦39对农药最敏感口l。本文研究 冷却及低温保存对小麦酯酶活性的影响，为小麦酯酶在农药传感器中的应州奠定基 础。 酶是一种相当脆弱的物质pl，倘若不采取适当的处理，则会导致酶火活或是引起 变性，小麦酯酶也不例外。低温酶学是低温生物技术的一部分【4】。它研究酶经历低温 后的性质变化。如降温和升温速度对酶活性的影响等。不同酶的低温性质不一样，不 同保护剂对酶的保护作用也不一样。比如，JFCarpenter等曾研究了28种化合物对乳 酸脱氦酶(LDH)的保护能力，据其研究结果，聚乙二醇(MW600)对LDH的低温 保护作用最好pJ．M．Bbreda等采用不同的降温速度研究冷冻解冻对转化酶(invenase) 活性的影响时，发现不同的冷却速度对酶活的影响较大16】。 因此，对于那些还没被进行过低温性质方面研究的酶。如果要将其冻干或将酶液 在低温下保存，就需要对该酶进行有关低温性质方面的研究． 2．材料与设备 2．1材料：小麦：豫麦39．来自中国国家小麦工程中心(郑州)；二甲弧砜。乙二醇， 聚乙二醇，无水乙酸钠，蔗糖。甘油和氯化钠购于上海长城科学仪器公司：乙酸．a．萘 酯，上海青浦合成试剂厂生产；同蓝B盐购于上海化学试剂公司。 本j；|}矗得到目家自然科学基金项臼。撵测农药残留，L物传感器热纠题的研究” 和卜海市教委的资助(2001n．4) 993 2．2设备：722S分光光度计，上海分析仪器厂；离心机，北京医用离心机厂；恒温水 浴，上海医用仪表厂；多功能食品加工机，上海海菱电器有限公司。 3实验 3．1小麦酯酶制各：用蒸馏水提取，小麦与水的比例为1：5(w／V．g／mL)，在4℃浸泡 15 h，用食品加工机制汁。加工2 min， min，将汁倒出，然后以4000r／min的速度离心l 将上清液过滤即为小麦酯酶原酶。 3．2基液、显色液配备；将100 mg乙酸．a一萘酯溶于80mL无水乙醇即为基液。将125 mL蒸馏水，以180次／rain的速率振荡30 mg固蓝B盐溶于80 rain即为显色液‘”。 3．3缓冲液配备：首先用蒸馏水制备1％丙酮溶液，取2．429醋酸，然后用l％丙酮溶 液先将醋酸稀释至800 mL，用磁力搅拌器搅拌，用pH计监测溶液的pH值。在搅拌 过程中缓慢加入NaOH以调整溶液的pH值，缓慢地调整pH值，将pH值调整到pH5．5 即可，然后将调整好pH的溶液倒入1L容量瓶中，用1％丙酮定容，溶液即为O．04M pH