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器官打印：计算机辅助基于喷射技术的三维组织工程 Vladimir Mironov1, Thomas Boland2, Thomas Trusk1, Gabor Forgacs3 and Roger R. Markwald1 1美国南加州查尔斯顿南加州大学医学缘细胞生物学与解剖学系 2美国南加州克雷蒙森大学生物工程系 3美国密苏里州哥伦比亚市密苏里大学物理与生物学系 组织工程学立志与消除器官移植的危象。然而接合有血管的三维软器官仍然市一个巨大的挑战。器官印刷，一种定义为计算机辅助的基于喷射技术的三维活人体组织工程技术，为危象的消除提供一个可行的方案。器官印刷包括三个连续的步骤：前处理过程，为器官蓝图进行规划；处理过程，实际的器官印刷过程；后处理过程，为器官的生长提供条件并加速它的成熟。一种可以印刷凝胶体、单细胞和细胞群的细胞印刷机已经得以开发。逐层铺设固化的热逆性材料的薄层可以作为印刷材料。工程方法与发生生物学中关于胚胎组织流动性理论的结合使得发明一种新的三维快速原型印刷技术成为可能，这项技术将显著地加速和优化细胞的接合和组织的接合。 “给我们工具，我们就能把活干完”―― 温斯顿·邱吉尔 虽然，组织工程与器官印刷只是最近才引进的术语（分别于1987年和1999年），但关于细胞接合和在组织接合的研究却有了很长的一段时间，该研究深深地植根于发生生物学1。几代、杰出的海洋生物学家和发生生物学家对于细胞和组织接合现象2、3、组织亲合力4、细胞粘着力5特别是对于胚胎组织流动性6 7的研究工作为现代组织工程学的建立奠定了生物学基础。正是由于认识到这一点，有关现代组织工程学的教科书中都有讲述发生生物学的部分8。组织工程学自我定位为发生生物学的一种实际应有9。器官印刷——快速原型理论的一种应用技术（例如：细胞或细胞基质的逐层沉积）——正发展成为一种很有前途的设计新的组织和器官的应用技术。本文将介绍发生生物学是如何被应用到器官印刷中的，并描述这项新技术的关键步骤和组成。同时讨论具有挑战性的技术难题，并就其解决提出可能的方案，最后对印刷人体组织与器官的可行性进行总体的评估。 “顺应自然，而或违背自然？” 组织比如说一根血管可以在不需要任何的人工合成的聚合物10 11的参与下成功的接合生成。这个事实大大的支持了我们的观点：组织工程领域未来的发展将越来越建立在并依赖于发生生物学原理的有效应用上。可以很有把握的预测：下一代的组织工程学家将信奉“顺应自然，而非违背自然”的信条。不管是组织工程学还是发生生物学都正在进行细胞的接合、细胞外基质的沉积和积累以及干细胞的研究。对这些领域进行综合的研究可能也必将带来空前的成就。 图1。胚胎心肌环的融合。心肌环是从Stage 15–16 HH的小鸡的心室上切取的，此时小鸡的心脏中仅有心肌、心内膜和一些间隙基质。单独的环稳定地跳到了好几天;I (a) 近距离排放的环一夜间融合 并b) 整体跳动. (c). 图示了器官印刷技术的原理：将细胞群逐层排放在固化者的热逆性凝胶体上，细胞群逐渐地融合、变体形成三维的管状物。8. 我们认为会加速器官印刷术发展的另一个因素就是时间。组织工程师就好医生和病人一样不可能有数年的时间等待，直至所设计的组织和器官产生形态上、生化上、机械的和功能上的区别。现存的组织工艺还不能快速地接合组织和器官。时间问题可以用发生生物学来解释，我们已经研究得到胚胎组织是质量和数量都变化的]黏弹性的流体6 7，它具有描述得很好的流动和溶合行为。正如Thompson 等人8的文章中证明的当胚胎鸟的心脏管起先被切成单独的心“环”和紧密地放置在一个管状的支架后，这些“环”在一夜之间融合和变体，从而形成一个同步跳动的心管(图1a b)。在融合的过程中所用的步骤现在仍然没有被完全的了解，但是这种性质和该过程时间长度的发现对于组织工程师来说是激动人心的。在组织融合的整个过程中可能包括细胞外基质的重新建模、细胞的迁徙、细胞间联系与接合的重构或这些过程的结合。即便如此，上述简单的发生生物学实验为我们提供了清晰的认识，这个认识描述了现在研究所提出的器官印刷的理论起点。 图2。细胞印刷机和印刷的细胞和组织结构的图像。(a) 计算机辅助的基于设计的细胞印刷机的展示。(b)牛的大动脉的内皮细胞被以50微米一滴的大小印刷成一条线。72小时以后这些细胞依附在Matrigel支撑上并保持在各自的位置上。 (c) 交叉的p层表示相继铺得的层各自的厚度。(d) 实际的细胞印刷机和九个喷嘴的印刷机头部分的照片。(e). 印刷机通过一个双向的并行电缆及九个用于混合的喷头与PtdCho 相连。我们使用HPGL2格传输信息给打印机。印刷每一个点所需的喷嘴的选择和坐标的确定都由PIC 16F877微芯片控制准确地传输。内皮细胞群被印刷在胶原质上在融