六氯苯(HCH)对DNA遗传毒性的分子机理的研究.pdfVIP

持久性有机污染物论坛2006暨第一届持久性有机污染物全国学术研讨会论文集 六氯苯(HCH)对DNA遗传毒性的分子机理研究 李东吴，张晓明，孙英’ 摘要：有机氯类农药由于大多具有“三致”效应和遗传毒性，并且在全球范围的各种环境介质 (海洋、土壤等)以及动植物组织器官和人体中广泛存在，已经引起了世界各国的广泛关注，成为 全球性环境问题。本研究通过紫外与荧光光谱法研究了有机氯农药六氯苯(HCH)与DNA的相互 作用。结果表明，六氯苯(HCH)可以嵌入到小牛胸腺DNA的双链中形成DNA加合物，从而使 六氯苯(HCH)的荧光光谱发生变化，使荧光强度增强。通过计算得到在20℃、35℃下小牛胸腺 六氯苯(HCH)在ctDNA分子上的结合位点数n分别为0．4687和0．3486。通过对热力学函数的计 根据热力学参数与作用力类型的关系可以推断六氯苯(HCH)分子与ctDNA之间的相互作用力主 加深。具体机理有待于进一步探索。 关键词：光谱法、六氯苯(HCH)、小牛胸腺DNA、超螺旋DNA、相互作用、DNA损伤 持久性有机污染物(PersistentOrganicPollutants，简称POPs)，由于具有较强的遗传毒性，已经 越来越受到世界各国的广泛关注。有机氯农药六氯苯，俗称六六六(0【．、p．、y．、8-BHC)，由于可 通过胃肠道、呼吸道和皮肤吸收而进入人体，并且在全球范围的各种环境介质(海洋、土壤等)以 及动植物组织器官和人体中广泛存在，成为了全球性环境问题，它已被美国环保总署(EPA)列入优 先检测的有机污染物“黑名单”，也是联合国环境规划署(UNEP)列为首批控制的有机污染物【l-4]。 众所周知，DNA是遗传信息的载体，包含了有机生物体中极为丰富的信息，是生物体内最基本、最 为关键的遗传物质。近年来，大量研究表明，人们的健康，衰老，对疾病的免疫，以及各种病症产 生几乎都与DNA有关，而且许多广泛应用的抗癌药物、抗生素药物和保健营养品的作用靶标都是 DNA。因此，研究有机氯类农药与DNA的作用对于研究两者相互作用的反应机理和有机氯类农药 在人体内如何代谢有着极为重要的意义，对评价持久性有机污染物的暴露风险设定指标，为今后持 久性有机污染物的控制策略提供参考。 1．实验部分 1．1仪器和试剂 日立F一4500荧光分光光度计；北京普析通用仪器公司Tu．1901型双光束紫外可见分光光度计； 小牛胸腺DNA(Calf DNA购自北京必克瑞生物科技有限公 200ug／mL的溶液，配好保存于4℃的冰箱中备用；pBR322 司，配制浓度为lug·ml。1的溶液，配好后保存于4℃的冰箱中备用。六氯苯由中国农业大学农业 部农产品质检中心提供(纯度95％)，配成5．5ug／mL的溶液；缓冲溶液由10mmoFL的Tris以及 lOmmol／L的EDTA组成，用盐酸调节pH=7．00；实验所用的水都为二次蒸馏水。 1．2实验方法 荧光实验：分别用不同浓度的六氯苯溶液与ct DNA溶液混合，在20。C和35C温度下水浴30 分钟后，分别测定溶液的荧光强度。 持久性有机污染物论坛2006暨第一届持久性有机污染物全国学术研讨会论文集 DNA溶液混合，放在370C水浴中30分钟后， 电泳试验：分别用不同浓度的六氯苯溶液与pBR322 用300W中压汞灯照20分钟后，用凝胶电泳进行测定。 2．结果与讨论 2．1六氯苯与小牛胸腺DNA作用的荧光光谱 从图l中可以看出小牛胸腺DNA对六氯苯有荧光增强作用，而且随着小牛胸腺DNA的浓度 增大六氯苯的荧光强度也增加。 lg[(F氐)／F]=lgK+nlg[Q] 一O．2 一O．4 lO —0．6 O —9 —8．5 坞 -7．5 550 600 650