聚合酶链反应(PCR)检测鸭瘟病毒弱毒与强毒方法的建立与应用研究.pdfVIP

中国畜牧兽医学会动物微生态学劳全第三届第七次学术研讨会论文集(2004年) 聚合酶链反应(pca)检测鸭瘟病毒弱毒和强毒方法的建立和应用研究 宋涌，程安春。，汪铭书，刘菲，廖永洪，袁桂萍，韩晓英，徐超 (四川农业大学动物科技学院禽病研究中o，四川，雅安，625014) Virus，DPV)的引物， 根据Genbank文献合成了1对用于扩增鸭瘟病毒(DuckPlague 其扩增幅度为498bp，以鸭瘟弱毒CHa株DNA．为模板，筛选最佳反应条件和试剂工作浓 DNA，能特异地检测DPV 度，建立了检测DPV的PCR方法，该法最低能检测到10fgDPV 弱毒和强毒，而对鸡马立克氏病毒、鸡传染性喉气管炎病毒、鸭病毒性肝炎病毒、多杀 性巴氏杆菌、大肠杆菌、鸭副伤寒沙门氏菌和鸭疫里默氏杆菌呈阴性。雏鸭经皮下接种 鸭瘟弱毒DPv—Cha株后4h，即可在心、肝、脾、肾、法氏囊、胸腺、胰腺、延脑、大脑 和小脑检出DPV的DNA，24h和120h均能从血、心、肝、脾、肺、肾、十二指肠、直 肠、法氏囊、胸腺、胰腺、延脑、小脑、大脑、胸肌、骨髓、粪便、舌头、食道等19种 组织器官检出DPV的DNA。成年鸭接种强毒SOl株后2h能从肝、脾、法氏囊、胸腺、 大脑检出DPV的DNA，感染24小时和感染死亡鸭能从血、心、肝、脾、肺、肾、十二 指肠、直肠、法氏囊、胸腺、胰腺、口腔分泌物、皮肤、大脑、胸肌、骨髓、粪便、舌 头、食道检出DPV的DNA。该法可用于DPV感染的早期诊断、鸭产品的进出口检疫、 鸭瘟分子流行病学调查及鸭瘟弱(强)毒在鸭体内的分布研究。 关键词聚合酶链反应诊断鸭瘟病毒，弱毒，强毒 Viral 鸭瘟(Duck Enteritis，DVE)，是由鸭瘟 Plague，DP)，又名鸭病毒性肠炎(Duck 病毒(DPV)引起的鸭、鹅等水禽的一种急性败血性传染病，临床以体温升高，两腿麻 痹、下痢、流泪和部分病鸭头颈肿大为特征。该病为一种广泛嗜全身性感染的传染病， 其病理特征是血管损伤，体腔出血，消化道出血、炎症和坏死，淋巴器官受损以及实质 器官的退行性变化，该病发病率和死亡率都甚高，是危害养鸭业的最为严重的传染病之 在广东发现鸭瘟，现在我国各养鸭地区均有该病的发生和流行fl一1。目前实验室检测DPV 的方法包括病毒分离鉴定、血清中和试验、反向被动血凝试验、琼脂凝胶沉淀试验、荧 光抗体试验、微量固相放射免疫测定法、酶联免疫吸附试验(ELISA)、核酸探针等，这 些方法用于感染DPV死亡鸭组织中病原的检测存在这样或那样的不足，如需要较长时间、 或不易标准化，或敏感性较低，或易造成环境的放射性污染等，一些方法对感染潜伏期 尚未出现II．床症状的鸭也不能检出其体内的DPV，一些方法还不能检测病死鸭组织中的 ‘基金项目：四川省杰出青年学科带头人基金后续赞助项目(编号：03ZQ026．028)和四川省教育厅青 年科技基金(编号：0lLA09) 通信作者。 中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第三届第七次学术研讨会论文集(2004年) DPV．使其在实际应用中受到一定限制。PCR作为一种新的分子生物学实验技术，具有 灵敏度高、快速特异、操作简单、易标准化等优点，对于检测标本中病原体的核酸序列 具有常规诊断方法无可比拟的优势，且应用于细菌、病毒的诊断检测已有较多的报道h”并 展示其良好的应用前景。近年国内外在运用PCR对鸭瘟病毒的分离物进行检测获得了良 好的效果[6qo]，但应用PCR对病死鸭组织中的DPV强毒和鸭瘟弱毒疫苗免疫鸭后体内抗 原进行检测崩来见有报道。 1材料和方法 HealthFort Virus，ILTV)疫 Laryngotmcheitis Dodge生产)，鸡传染性喉气管炎病毒(Infectious 苗株(哈兽研生产)，及鸭病毒性肝炎病毒(Duck Virus，DHV)SC-QL株、鸭源多杀