锯缘青蟹一种新的阴离子肽Scygonadin的分离、鉴定和抗菌特性.pdfVIP

福建I门 第三届海洋生物高技术论坛 200s。08．19．23 锯缘青蟹一种新的阴离子肽Scygonadin的分离、鉴定 与抗菌特性◆ 王克坚州黄文树“2杨明1李少菁1王桂忠1 (1厦门大学近海海洋环境科学国家重点实验室福建厦门361005 2集美大学水产学院福建厦门361021) 摘要：利用离子交换层析和反相层析技术，分离锯缘青蟹(Scyllaserrata)精浆，获得一种新 的蛋白多肽。抗菌试验结果表明该多肽对溶壁微球菌(Micrococcus lysoleiksicus)和嗜水气单 胞菌(Aeromona 质谱测定该肽的分子量为11KDa，并用Edman降解法测定了其N端20个氨基酸序列。应用简并 个氨基酸肽段，预测其N端24个氨基酸为信号肽，其余为成熟肽。通过肽指纹图谱测定验证 其推导的氨基酸序列的正确性，结果表明所克隆的抗茵肽编码序列是正确的。由于scygonadin 的成熟肽理论PI值为6．09，故推断其为是阴离子肽。分析检索基因和蛋白数据库结果显示， 该多肽与所有已知的抗菌肽序列无同源，陛(相似性14％)。基于其分离自锯缘青蟹的性腺， 且具有抗菌活性，建议命名该抗茵肽为scygonadin。此外，本研究还确定了其基因序列及其 组成，该基因细．DNA含2100bp，其中有3个外显子和2个内含子。本研究首次报道从甲壳动物 的精浆中分离出一种阴离子肽，Scygonadin的发现为研究锯缘青蟹在潮间带生存的免疫机制 以及生殖免疫机制等奠定基础。 关键词锯缘青蟹抗菌肽Scygonadin分离基因克隆 水产养殖生产过程中曾因过量使用抗生素，增强了微生物耐药性，使传统的抗生素日益 失效。迄今，几乎所有的抗生素都不同程度地出现了耐药菌株，而新药开发却相对滞后，有 人认为抗生素的时代几近终结(1)。近二十多年来，人们从各种生物体内分离到一类具有广谱抗 微生物(包括细菌、真菌、病毒和寄生虫等)活性的多肽类物质——抗菌肽，因其与传统抗 生素作用模式不同，微生物不易产生耐药性，有望替代传统抗生素药物，因而倍受医药学界 关注(1’。海洋的生物资源丰富，国内外学者均十分关注海洋生物资料的开发和利用，海洋甲 壳动物种类多，分布广，进化程度低，免疫防御完全依靠先天性免疫反应，而抗菌肽可能是 其先天免疫因子中最重要的成分之一。因为海洋甲壳动物生存于微生物含量较为丰富的海洋 环境中，因而推测其自身先天性免疫系统可能较陆地动物具有特殊性，其抗菌肽种类、结构 和功能可能更丰富，I飙此，近年，对海洋甲壳动物的抗菌肽的研究与开发利用较为活跃(2)。 锯缘青蟹(Scylla +国家“863”资助项目(2002A603013)；厦门市科技局资助项目(3502220021052) 4通讯作者：王克坚，E-maihwkjian@xmu．edu．crl 167 霍藿曩q 第三届海洋生物膏技术沦妖 2005．08．19-23 海南沿岸水域，同时也分布于东南亚、澳大利亚、日本、印度、南非等海域。青蟹个体大、 生长快、适应性较强，且营养丰富、商品价值高，是东南亚沿海重要的海洋经济蟹类之一(3)。 国内外围绕着养殖生产的需要而开展锯缘青蟹的繁殖生物学的研究，并取得一系列成果，但 是，主要集中于雌雄生殖系统的结构与功能、受精生物学、卵巢发育、卵巢发育过程中神经 内分泌调控和不同器官组织生化组成及其变化、以及胚胎发育的实验研究。而对锯缘青蟹繁 殖相关的免疫因子研究很少。锯缘青蟹的生殖孔与外界环境相通，环境中的微生物危害其繁 殖，人们认为是精液中的蛋白或多肽起到保护作用，使其免遭微生物的侵扰。在锯缘青蟹中 G．200 迄今仅Jayasankar等人的报道，精浆中具有抗常见海洋细菌的活性，其后采用Sephadex 凝胶层析初步纯化并证实，抗菌活性物质为一分子量约20Ku的蛋白(4)。该研究进一步证明了