Pycnoporus sp．SYBC-L3种子培养对深层发酵产漆酶的影响.pdfVIP

第3期 刘家扬 ，等 ：Pycnoporussp．SYBC—IJ3种子培养对深层发酵产漆酶的影响 ‘33 · Pycnoporussp．SYBC—L3种子培养对深层发酵产漆酶的影响 刘家扬1,2廖祥儒 (1．河南黄淮学院生物工程系，河南 驻马店463000； 2．江南大学 工业生物技术教育部重点实验室 ，江苏 无锡214122) 摘要：对Pycnoporussp．SYBC一13深层发酵产漆酶种子的培养及接种种龄进行了优化。结果表明，从平板直接接种菌丝片或者孢 子悬液到发酵产酶培养基，生物量及漆酶活力都非常低；采取种子培养并接种发酵培养基可提高漆酶活力；该菌株在种子培养基 中以菌丝球的形式生长，菌丝球的大小与接种量有关，接种量小，菌丝球就大，相反接种量大，菌丝球则小；从平板到种子培养基的 转接过程中，以洗孢子的方式接种要略优于打孔的方式；在种子培养的过程中添加玻璃珠导致菌丝球严重破裂 ，生长减缓 ，不利于 进一步深层发酵产漆酶；种子在不同的培养基中生长，以PDA培养基为最好；在以PDA为培养基时，接种量在 1O％是深层发酵产 漆酶活力最高；种龄在第 3天时为最好。经过种子培养的优化后 ，进一步深层发酵产漆酶活力提高了6倍。 关键词：发酵；漆酶；种子；优化 中图分类号：Q554 文献标识码 ：A 文章编号：1008—021x(2015)03—0033—04 漆酶是一种含铜的多酚氧化酶 ，具有广泛的底物，不仅 离心机：TGL一16G型，上海安亭科学仪器厂； 能催化单酚、二酚、多酚等酚类物质的氧化，还能催化芳胺及 分光光度计：UV一1600PC型，上海迈普达公司； 一 些非酚类物质的氧化，在对底物的催化氧化过程中，分子 恒温水浴锅：KW 一1000DB型，金坛市杰瑞尔电器有限 氧被还原成水。漆酶来源非常广泛 ，包括植物、动物、昆虫、 公司； 细菌及真菌等，但漆酶的主要生产者是白腐真菌，尤其是担 恒温振荡培养箱：SKY一2102C型，上海苏坤实业有限 子菌。近年来 的研究发现 ，由于漆酶具有广泛的底物催化 公司。 性，漆酶在工业中也具有非常广泛的应用，如纸浆的漂泊及 1．3 菌丝球的制备及 电镜观察 去木质素、染料脱色、生物传感器 、有机合成、环境修复等。 在 3022下于PDA平板上培养实验菌株 7d，菌落直径为 要想将漆酶有效的应用于工业中，漆酶的大量生产是必不可 9cm。然后用 10mL无菌水冲洗菌落，取 1mL接人50mL 少的。在所有的漆酶生产者当中，由于真菌能高产漆酶其所 种子培养基 (5％葡萄糖，1％酵母膏，0．5％蛋白胨)，种子培 产漆酶催化性能好而受关注 。而在产漆酶的真菌中，密孔 养条件为温度 3022、转速200r／min，培养时间为2d，该培养 菌属 (Pycnoporus)被广泛认为是一个有效的生产者。为了提 液即为种子液，其中的菌丝球用于电镜观察。 高漆酶的产量，众多研究集 中在对培养基及培养条件的优 1．4 液体发酵产酶培养基 化，但种子的培养及接种方案同样非常重要。到 目前为止， 葡萄糖 1％，酒石酸铵0．4％，磷酸二氢钾0．1％，磷酸氢 有关种子的培养及对产酶影响的报道较少。之前的研究中， 二钠0．02％，七水硫酸镁0．05％，硫酸锰 0．0034％，五水硫 接种的方法各种各样 ，如 Lu等人采取直接在发酵培养基中