2015-2016学年高中生物 5.2多聚酶链式反应扩增DNA片段同步训练（含解析）新人教版选修1.docVIP

第17课时　多聚酶链式反应扩增DNA片段 目标导航　1.知道细胞内参与DNA复制的各种组成成分与反应条件；知道DNA合成方向。2.理解PCR的原理；掌握PCR的基本步骤及每个步骤前后发生的变化。 一、PCR技术的原理 1．PCR扩增方向 (1)3′端和5′端：为了明确地表示DNA的方向，通常将DNA的羟基(—OH)末端称为________，而含____________的末端称为________；一个双链DNA分子中含两个3′端和两个5′端，如果一条链的方向是________，则另一条链的方向就是________，这就是反向平行的含义。 (2)DNA分子中相邻两个脱氧核苷酸残基通过________________相连，该化学键是由一分子脱氧核苷酸中3号碳原子上的羟基(—OH)，与相邻的另一分子脱氧核苷酸中5号碳原子上的磷酸基团脱水聚合而成。所以DNA的合成方向总是从子链的________向________延伸。 2．PCR技术原理 (1)PCR原理：DNA分子在一定条件下可以进行半保留复制。 (2)DNA的热变性原理：在________的温度范围内，DNA的双螺旋结构将解体，双链分开，这个过程称为________；当温度缓慢下降后，两条被分离的DNA链又会重新结合成双链，这个过程称为________。 3．生物体内DNA复制与PCR反应的区别 体内复制 PCR反应 解旋 在______作用下，细胞提供能量，部分解开 加热至______，双链全部解开，不需解旋酶 引物 一小段RNA 可以是RNA或单链DNA分子片段 合成子链 在引物基础上，一条链连续合成，另一条链不连续合成 分别从两条链的______开始，都是连续合成，控制温度______ 特点 ____________，半保留复制 体外迅速扩增 Taq DNA聚合酶 ______ ____ 循环次数 受生物体自身控制 30多次 相同点 生物体内的DNA复制和PCR体外DNA扩增都需要____、____________作原料、____，子链延伸的方向都是从______到______，且都需要在一定的缓冲溶液中进行 二、PCR的反应过程 1．反应条件 (1)稳定的缓冲液环境。 (2)DNA模板。 (3)分别与模板DNA两条模板链相结合的两种引物。 (4)A、T、G、C四种脱氧核苷酸。 (5)耐高温的DNA聚合酶，一般用Taq DNA聚合酶。 (6)能严格控制温度变化的温控设备。 2．过程 (1)________(90～95℃)：双链DNA模板在热作用下，氢键断裂，形成单链DNA。 (2)________(55℃左右)：两种引物通过碱基互补配对与两条单链DNA结合，形成局部双链。 (3)________(72℃左右)：在Taq DNA聚合酶的作用下，以四种脱氧核苷酸为原料，根据碱基互补配对原则，从引物的5′端→3′端延伸合成与模板互补的DNA链。 3．结果 (1)PCR的每一轮循环包括变性、复性和延伸三步，从第二轮循环开始，每次循环的产物也做模板参与反应，并且由引物Ⅰ延伸而成的DNA单链会与引物Ⅱ结合，进行DNA的延伸。这样，DNA聚合酶只能特异地复制处于两个引物之间的DNA序列，使这段固定长度的DNA序列呈____________。 (2)PCR一般要经历三十多次循环，处于两引物间固定长度的序列数目约为________。 三、PCR反应的实验操作流程 1．操作步骤 ________：按照PCR反应体系的配方将所需试剂摆放于实验桌上 　 ________：用微量移液器按照配方在微量离心管中依次加入各组成成分 　 ________：盖严离心管口的盖子，用手指轻轻弹击管壁 　 ________：将微量离心管放在离心机上，离心约10 s。目的是使反应液集中在离心管底部 　 ________：将离心管放入PCR仪中，设置程序进行反应 2．操作提示 (1)避免外源DNA污染：所用仪器、缓冲液、蒸馏水等使用前必须进行____________。 (2)缓冲液和酶分装成小份，并在________储存。 (3)每添加一种反应成分，更换一个________的枪头。 (4)混匀后离心处理，使反应液集中在________底部。 3．实验中DNA含量的测定 理论上DNA扩增呈指数增长，即一条DNA片段循环n次后的数目为2n，但实际可能会有诸多因素影响DNA含量，所以需要对DNA含量进行测定。 (1)原理 DNA在260 nm的紫外线波段有一强烈的吸收峰。峰值的大小与DNA的含量有关。可以利用DNA这一特点进行DNA含量的测定。 (2)过程 ①稀释：2 μL PCR反应液，加入98 μL蒸馏水，即将样品进行50倍稀释。 ②对照调零：以蒸馏水作为空白对照，在波长260 nm处，将紫外分光光度计