应用抑制性差减杂交筛选副猪嗜血杆菌4型菌株可能毒力基因.pdfVIP

358 o2011年学术年会 T030073 应用抑制性差减杂交筛选副猪嗜血杆菌4型菌株可能毒力基因 2‘ 李淼1’2李春玲L宋帅k2杨冬霞1’2 (1．广东省农业科学院兽医研究所，广东广州510640；2．广东省兽医公共卫生公共实验室，广东广州 510640) 引言 副猪嗜血杆菌(Haemophilus 亡率为特征的格拉泽氏病(Glasser’sdisease)的病原体，也是全球范围内影响养猪业的典型细菌性疾 病之一。目前，尚无检测副猪嗜血杆菌毒力菌株的快速、特异的方法，其致病机制也不明确，而该菌的 毒力因子和相应毒力基因的研究也处于探索阶段，这就为该病的诊断和预防带来了很大的困难。因此， 寻求致病基因对于了解副猪嗜血杆菌的致病机理和有效防治该病具有重要意义。 材料方法 subtractive 本研究采用抑制性差减杂交(Suppression 分析和PCR鉴定进行差异基凶片段的筛选。 结果 从构建的文库中共筛选得到7个特异性差异基因片段。经同源性分析，其中5个片段分别与噬菌体重 组蛋白、糖基转移酶／荚膜多糖磷酸转移酶、磷酸核糖甲酰甘氨脒合酶、核糖体蛋白丙氨酸转移酶和ABC 型硝酸盐／磺酸盐／碳酸氢盐转运系统周质蛋白等编码的基因有同源性；2个差异基因片段与功能未知蛋 白或假定蛋白编码基因有关。利用PCR对上述可能与毒力相关的差异基因片段在9种不同血清型HPS中 的分布进行了检测。结果表明，7个片段存在于多数的有毒力菌株(血清4、5、12、14和15型)中，而 在无毒力菌株(血清3和11型)中均未检测到。 讨论 交文库，对文库中的克隆进行特异性鉴定及功能分析，获得7个差异基因序列。经检测上述差异基因在 HPS不同血清型的有毒力菌株中分布比较广泛。这一发现有助于区分HPS菌株的毒力类型，将为HPS不 同毒力菌株的PCR检测方法的建立及检测猪群中所携带的毒力株等奠定良好基础，同时可借助基因步移 等技术来发现完整的毒力基因，以便开展HPS致病机制研究。 参考文献 Sack N．Identificationofnovel virulenceassociatedfactorsin [1l M，Balms potential Haemophilus Microbiology，2009，136(3-4)：382-386． M．Identificationandcharacterizationofnovel M，GuoY’ZhaoJ，Hu A，ChenH，Jin immunogenic [2】Zhou Q，HuY，Zhang of outermembrane seroyar5．Vaccine，2009，27(38)：5271·5277． proteinHaemophilusparasuis