乌药ISSR扩增条件的优化.pdfVIP

西北林学院学报2008，23( 6) ：94～97 Jour na l of Nor t hwes t For e st r y Un i v er s i t y 乌药I SS 扩增条件的优化 ， 顾婧婧 1’2， 金则新2 。 ， 李钧敏 ， 李建辉2 毕泉鑫 ( 1 ．西南大学三峡库区生态环境教育部重点实验室，重庆北碚40 07 15}2．台州学院生态研究所，浙江临海3170 00) 摘 要：为了确保I SS 分析的可靠性和重复性 ，有必要进行I SS —PC 反应体系的优化。以浙江 省天台山乌药( Li nder a aggr egat a) 自然种群 随机个体的基因组DNA为研究对象，通过对反应体 系中的M92+浓度、dNTP浓度、模板DNA用量、Taq DNA聚合酶用量 、BSA浓度 、引物用量进行 筛选和优化 ，得出了适用于乌药I SS 分析的扩增条件：109L PC 反应体积，1 ×Taq酶配套缓冲 液( 2 00 mmol ·L一1 Tr i s ·HCl ，PH 8 ．8，100 mmol ·L一1 KCl ，1％Tr i t on X一100 ，100 mmol ·L一1 ( NH4) 2S04 ，20 mm0 1．L- 1 MgCl 2) ，0．5U Taq DNA聚合酶，10 ng模板DNA，10 pmol 引物，O．4 mr n01 ．L- 1 dNTP。利用优化反应体系从100个I SS 引物中筛选出12个重复性好 、稳定性高的引物 对20个乌药个体的DNA进行扩增，共得到142个位点，其中，102个为多态位点，多态位点百分率为 7 1．83 ％，Nei 指数为0 ．284 3，Shann on信息指数为0．4 15 3，乌药的遗传多样性处于较 高水平。 关键词 ：乌药 ；I SS ；优化；遗传多样性 中图分类号 ：Q948．1 文献标识码 ：A 文章编号：100 1—746 1( 2008) 06—0094—04 Opt i mi z at i on of t he I SS Condi t i ons i n Li nder a aggr e gat a GU J i n g-j i n 91”。 JI N Ze-xi n2 。LI J un- mi n2 。LI J i an—hui 2 。 BI Quan—xi n2 ( 1．Ke y Lab or at o r y of Eco- envi r onme nt s i n Thr ee Gor ge s ei er voi r eg i on ’5{Mi ni s t r y of Educ at i on ) - Sou t hwes t Univers i t y 。 Bei bei ，Chon gqi ng 400715。Chi na ；2 ．I ns t i t ut e of Ecol ogy- Ta i zh ou Uni ver s i t y 。Li n hai - Zhej i ang 317 000。Chi n a) Ab s t r ac t ：I t i s neces s ar y t O opt i mi z e t he I SS —PC r ea ct i on sy st e m t o make s ur e of get t i ng t he r e l i abl e an d r epeat abl e r es ul t s i n t h