EZH2mRNA在骨肉瘤中的表达及意义.pdfVIP

EZH2 mRNA EZH2 mRNA EEZZHH22mmRRNNAA在骨肉瘤中的表达及意义 吴晓春 杨春雷 王建军 钟正明 吴建华 湖北省武汉市黄陂区人民医院骨2科（430300） 【摘要】 目的 探讨EZH2 mRNA骨肉瘤的异常表达与骨肉瘤发生发展的 关系。方法 采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测50 例骨肉瘤组织中EZH2 mRNA的表达情况，并对结果进行统计学分析。结果 EZH2 mRNA在骨肉瘤组 织及正常骨组织中的表达分别为66.0%和6.7%，差异有统计学意义(P0.05)； EZH2 mRNA 在骨肉瘤组织中的阳性表达率与病理分级有关（P0.05），而与性 别、年龄及病理类型无关（P0.05）。结论 EZH2 mRNA参与了骨肉瘤的发生 与发展，EZH2mRNA可能成为骨肉瘤一个潜在的基因治疗靶点。 【关键词】 骨肉瘤；EZH2 mRNA；基因表达 骨肉瘤是最常见的原发于骨组织的成骨性恶性肿瘤，尤以青少年高发，其恶 [1] 性程度高，且对放化疗敏感性低，易复发和转移，预后较差 。目前临床上对骨 肉瘤诊断及治疗上尚无特殊有效指标及方法。EZH2 作为一种果蝇zeste 基因增 强子的人类同源物，在多种肿瘤中呈高表达状态，具有促进细胞增殖及肿瘤细胞 [2,3] 的扩散的恶性表型 。目前EZH2 在骨肉瘤中的相关研究鲜有报道，故本研究 采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测骨肉瘤组织中EZH2 mRNA 的表达情 况，旨在探讨其与骨肉瘤的相关性，为其基因治疗提供参考依据。 1 1 11 资料与方法 1.1 一般资料 所有病例均为我院骨科2005年12月~2010年12月期间手术切 除的骨肉瘤标本50例，均经临床、影像学及病理切片证实，且术前均未行放疗 及化疗。其中男31例，女19例；年龄19~58岁，平均（24.5±5.6）岁。按Enneking 外科分期：Ⅰ期9 例，Ⅱ期26 例，Ⅲ期15 例；按Dahlin 病理分型：骨母细胞 型27例，纤维母细胞型6例，软骨母细胞型13 例，其它型4 例。同时取30 例 经病理证实的骨肉瘤旁骨组织作为对照，其中男17 例，女13 例；年龄21~56 岁，平均（22.7±5.8）岁。所有样品取出后均于-80℃冰箱中冻存。 1.2 方法 取 100 mg 骨肉瘤组织，使用 Trizol 试剂（美国 Invitrogen Life technologies公司），采用Trizol一步法提取总mRNA。采用RT-RNA方法，以β-actin 为内参，在同一体系中加入 EZH2 与β-acttin 两种引物进行扩增。其中 EZH2(332bp)，上游引物：5’-CTCCCGCTGAGGATGGATAC-3’，下游引物：5’-GG- CTCCACAAGTAAGACAGAGGTC-3’，β-actin(202bp)，上游引物：5’-GGCGG- CACCACCATG-3’，下游引物：5’-AGGGGCCGGACTCGT-3’。取3μL RNA逆转 录成cDNA，取其2μL 产物进行PCR扩增。PCR扩增体系为25μL，反应条件： 94℃ 预变性5min，94℃ 变性45s，58.6℃ 退火30s，72℃ 延伸 1min，共30 个循环，最后72℃延伸10min。取PCR产物8μL置于2%琼脂糖凝胶中（含溴 化乙锭0.5 μg/ml），以120V 电压电泳30min，在紫外线下可见相应长度的目的 基因及内参照的扩增条带。 2 1.3 统计学方法 采用SAS8.2软件进行统计分析，计数资料比较采用χ 检验或 精确Fisher概率法，P0.05视为有统计学意义。 2 2 22 结果 2.1 EZH2在骨肉瘤及正常骨组织中的表达 骨肉瘤标本与正常骨组织中EZH2 mRNA表达阳性率分别为66.0%(33/50)， 6.7%(2/30)，两者比较差异有统计学意 2 义（χ =26.82，P0.05）。内参照β-actin在骨肉瘤组织的表达强度与正常骨组织基 本一致。见图1。 EZH2