1核酸的结构和功能.ppt

tRNA分子中含有氨基酸臂、二氢尿嘧啶环、反密码环、额外环和T?C环五部分。 ⑷tRNA的三级结构: 倒“L”形。 1.2.2.2 rRNA（ribosomal RNA） ⑴ rRNA分子量为103~106D， 存在于核糖体(ribosome)中，核糖体中有60%是rRNA，其余40%是蛋白质。占总RNA的75%～80%。原核生物大肠杆菌的rRNA有5S、16S和23SrRNA三种，动物细胞有5S、5.8S、18S和28S rRNA四种。 ⑵ rRNA的结构 rRNA单链自身回折时按A-U，G-C的base配对原则形成部分螺旋区(发夹结构)，回折处没有base配对时形成凸环。一般rRNA分子有40%左右的螺旋区。 5srRNA也有类似三叶草形的结构，其他rRNA以螺旋或突环相间排列组成。 ⑶ rRNA的生物学功能 参与蛋白质的生物合成。 1.2.2.3 m RNA（messenger RNA） ⑴ mRNA是蛋白质生物合成的模板，它携带着从DNA分子中抄录而来的指令多肽链中氨基酸排列顺序的信息，是遗传信息的传递者，故称之为信使RNA。 每一种蛋白质都是由一种特定的mRNA编码，故细胞内mRNA种类很多，但每一种mRNA的数量却很少（5%以下），瞬时含量低，代谢率高。分子大小差异很大。 ⑵ mRNA的结构 典型的真核mRNA的结构顺序是： 帽子结构区-5’非编码区-起始密码-编码-终止密码-3’非编码区-polyA尾巴 原核生物mRNA一般为多顺反子，即在同一mRNA中含有编码多个蛋白质的信息(一个基因即一个顺反子) 真核mRNA通常是单顺反子，一 个mRNA只能编码一条多肽链。 真核和原核mRNA都是单链线状分子，内部有许多碱基互补区，当mRNA回折时可形成大量的发夹结构。 真核mRNA的5’ -端的帽子结构— m7GpppNm结构 1.3 核酸的理化性质及其应用 1.3.1 核酸的一般性质 ①RNA为白色粉末状，DNA是白色纤维状固体，二者均溶于水，而不溶于一般有机溶剂中，故常用冷乙醇从水溶液中将核酸沉淀出来。 ②核酸是两性电解质，但酸性强，与金属离子结合成盐，也可与碱性蛋白结合；介质pH大于4时，呈阴离子，电泳时向阳极移动；DNA在pH4～11间最稳定，超出此范围易变性。 ③大多数DNA为线性分子，长度可达数厘米，直径仅为2nm，故DNA溶液粘度很高，分子极易断裂；RNA溶液粘度较小。 1.3.2 核酸紫外吸收 核酸分子中的嘌呤和嘧啶碱基中含有共轭双键体系，因而具有特殊的紫外吸收光谱，其最大吸收峰位于260nm处。利用这一性质可定量测定核酸的含量或鉴定核酸的纯度。 纯DNA：OD260/OD280 = 1.8 纯RNA： OD260/OD280 = 2.0 样品中如含有蛋白质及苯酚等杂质，此比值明显降低。对于纯样品，读取OD260值即可算出含量；通常以 1单位OD值相当于 50 ?g/ml双螺旋DNA 40 ?g/ml单链DNA（RNA） 20 ?g/ml寡核苷酸计算。 此方法简便、快速、准确。 1.3.3 核酸的变性和复性 1.3.3.1 核酸的变性（denaturation） ⑴概念 核酸的变性是指因某些理化因素的影响使维持核酸空间结构的氢键和疏水键断裂，双螺旋结构解体，但不涉及核 苷酸间共价键的断裂。 核酸变性后，粘度降低，紫外吸收值增高(增色效应)，生物功能消失。 ⑵影响变性的因素 破坏双螺旋稳定性的因素都可使DNA变性。 DNA分子中的碱基处于配对和不配对的动态平衡状态，很多因素会引起它向不配对方向转变，即引起DNA变性。如高温、强酸、强碱、有机溶剂、尿素、酰胺等试剂、射线等。 高温：DNA稀盐溶液加热到80~100℃，几分钟内双螺旋键即解开，形成无规则的线团。 离子强度：提高溶液的离子强度，可中和DNA分子链上磷酸基团的负电荷，降低它们之间的排斥力，稳定DNA的结构。DNA通常保存在1molNaCl中。 极端的pH值：pH﹤1时，DNA的磷酸二酯键会被水解；pH﹥11.3时，DNA的所有氢键断裂。 疏水作用：甲醇可增加碱基的溶解度，三氟醋酸钠可降低DNA分子的疏水作用，破坏双螺旋结构引起变性。 尿素及甲酰胺：它们可与碱基之间形成氢键。 碱基堆积：氢键和碱基堆积是一致的，碱基堆积是一种协同作用，处于中间的碱基比两边的碱基稳定，线状双链DNA分子的两端常有7个未配对的碱基，因此少于15bp的双链DNA片段极不稳定。 ⑶ DNA的熔点（ Tm ） DNA的热变性过程中一半分子发生变性时的温度称为DNA的解链温度( melting temperature，简写Tm)或熔点，用 Tm 表示。DNA的