第一节 基因工程(一).docVIP

　　 基因工程（一） 主讲：黄冈中学优秀生物教师　严贻兰 一、知识概述 1、基因工程的诞生及基本原理； 2、基因工程的基本工具； 3、基因工程的基本操作步骤。 二、重点知识归纳及讲解 （一）基因工程 1、概念：指按照人们的愿望，进行严格的设计，通过体外DNA重组和转基因等技术，赋予生物以新的遗传特性，从而创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。 2、其操作水平在DNA分子水上进行设计和施工。 3、操作环境是在生物体外。 （二）基因工程的基本操作工具 1、限制性核酸内切酶——“分子手术刀” 来源 多数来自原核生物 作用 切割双链DNA分子 特点 识别特定的核苷酸序列，并切开特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键 结果 形成黏性末端或平末端 2、DNA连接酶——“分子缝合针” 　　（1）作用：将双链DNA片段“缝合”起来，恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键。 　　（2）DNA连接酶与DNA聚合酶的比较 　 DNA连接酶 DNA聚合酶 作用实质 都是催化两个核苷酸之间形成磷酸二酯键 是否需模板 不需要 需要 连接DNA链 双链 单链 作用过程 在两个DNA片段之间形成磷酸二酯键 将单个核苷酸加到已存在的核酸 片段上，形成磷酸二酯键 作用结果 将存在的DNA片段连接成重组DNA分子 合成新的DNA分子 3、基因进入受体细胞的载体——“分子运输车” 　　(1)载体的种类 　　①质粒：是一种裸露的、结构简单、独立于细菌拟核DNA之外，并具有自我复制能力的双链环状DNA分子。 　　②λ噬菌体的衍生物。 　　③动、植物病毒。 　　(2)质粒载体的特点 　　①能够在细胞内自我复制。 　　②具有一个或多个限制酶切割位点，便于供外源DNA片段插入其中。 　　③具有特殊的标记基因，供重组DNA的鉴定和选择。 　　(3)基因工程基本工具的比较 （三）基因工程的基本操作程序 1、目的基因的获取 　　(1)目的基因：主要是指编码蛋白质的基因。 　　(2)获取方法：从基因文库中获取、利用PCR技术扩增、人工合成。 　　(3)基因文库、基因组文库及部分基因文库 　　①基因文库：将含有某种生物不同基因的许多DNA片段，导入受体菌的群体中储存，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，称为基因文库。 　　②基因文库种类：基因组文库（含有一种生物的全部基因）、部分基因文库（含有一种生物的部分基因如cDNA文库）。 　　（4）PCR技术与DNA复制的比较 　 DNA复制 PCR技术 区 别 场所 细胞内 生物体外 酶 DNA解旋酶、普通的DNA聚合酶 耐热的DNA聚合酶(Taq酶) 温度条件 细胞内温和条件 在较高温下进行 解旋的方式 解旋酶催化 高温下变性解旋 结果 形成整个DNA分子 短时间内形成大量的DNA片段 联系 模板：均需要脱氧核苷酸链作为模板 原料：均为四种脱氧核苷酸(即dCTP、dATP、dGTP和dTTP) 酶：均需要DNA聚合酶进行催化 引物：均需要引物，使DNA聚合酶从引物的3′端开始连接脱氧核苷酸 2、基因表达载体的构建 　　(1)基因表达载体的组成：启动子、目的基因、终止子以及标记基因等。 　　(2)基因表达载体的构建方法 3、将目的基因导入受体细胞 　 植物细胞 动物细胞 微生物细胞 常用方法 农杆菌转化法(主要)，基因枪法和花粉管通道法 显微注射技术，病毒感染法 Ca2＋处理细胞法 受体细胞 受精卵或体细胞 受精卵 微生物细胞 转化过程 构建重组质粒→农杆菌→导入植物细胞→整合到植物细胞的DNA上→表达 构建重组质粒→显微注射→受精卵→获得具有新性状的动物 Ca2＋处理细胞→感受态细胞→重组质粒与感受态细胞混合→重组质粒进入感受态细胞 4、目的基因的检测与鉴定 类型 步骤 检测内容 方法 结果 分子检测 第一步 目的基因是否进入受体细胞 DNA分子杂交(DNA和DNA之间) 是否成功显示出杂交带 第二步 目的基因是否转录出信使RNA 分子杂交技术(DNA和RNA之间) 第三步 目的基因是否翻译出蛋白质 抗原—抗体杂交方法 个体水平检测 包括抗虫、抗病的接种实验，以确定是否有抗性以及抗性的程度；基因工程产品与天然产品的活性比较，以确定功能是否相同等 　　基因工程图解：抗虫棉的培育过程 典型例题 例1、下图是将人的生长激素基因导入细菌B细胞内制“工程菌”的示意图。已知细菌B细胞内不含质粒A，也不含质粒A上的基因。判断下列说法正确的是（　） A．将重组质粒导入细菌B常用的方法是显微注射法 B．将完成导入过程后的细菌涂布在含有氨苄青霉素的培养基上，能生长的只是导入了重组质粒的细菌 C．将完成导入过程后的细菌涂布在含有四环素的培养基上，能生长的就是导入了质粒A的细菌 D．目的基因成功导入的标志是受体细胞能产生出人的生长激素 答