基质金属蛋白酶及其组织特异性抑制物与环氧合酶-2在骨性关节炎中表达及临床生物学意义.pdfVIP

基质金属蛋白酶及其组织特异性抑制物与环氧合酶-2 在骨性关节炎中表达及临床生物学意义 1 1 2 闫堃 ，纪宗正 ，王民 1 西安交通大学医学院第二附属医院普外科，西安（710004 ） 2 西安交通大学医学院第一附属医院骨科，西安（710061 ） E-mail ：topestyk@163.com 摘 要：目的：观察COX-2 、MMP-3 和TIMP-1 在骨性关节炎中的表达，探讨其与OA 的 发生、发展的关系。方法：采用HE 染色及免疫组化法，检测OA 组及正常对照组关节软骨 组织切片中COX-2 、MMP-3 和TIMP-1 蛋白的表达情况，应用统计学方法对其在OA 的发 生、发展中与 OA 病理分级、临床影像学分级的相关性进行非参数分析。并运用 Spearman 相关分析检验对OA 组中MMP-3 蛋白与COX-2 蛋白的表达进行相关性分析。结果：骨性关 关节炎组中MMP-3 、TIMP-1 、COX-2 蛋白的阳性表达率分别为78.0% ，68.7% 和86.7%， 与它们在正常软骨组织中的表比较有显着性差异（p 0.05 ），MMP-3 、COX-2 与关节损伤程 度成正相关（p 0.05 ），TIMP-1 与关节损伤程度成负相关（p 0.05 ）。。结论：OA 中MMP-3 的变化与COX-2 变化无相关性。 关键词：骨性关节炎；基质金属蛋白酶3；组织特异性抑制物-1；环氧合酶-2；免疫组化S-P 法；细胞外基质 骨性关节炎(osteoarthritis,OA)是以关节软骨进行性损害为特征的慢性关节紊乱综合征, [1] 是常见的运动系统疾病 。其病理变化包括：软骨退变、软骨下骨硬化及囊性变形成、关节 边缘骨质增生以及滑膜慢性炎症等。目前，多数学者倾向认为骨关节炎疾病的发生发展是全 身性易感因素参与下局部因素的作用[2] 。 OA 发病过程中，滑膜成纤维细胞及其它相关的细胞既可通过分泌金属基质蛋白酶 (Matrix Metalloproteinases MMPs)等参与关节病变的慢性降解病理过程[3],也可通过释放各种 炎性因子如前列腺素 E2(PGE2) 等影响关节炎性病变进程。环氧合酶-2(Cyclooxygenase 2 ,COX-2)是前列腺素生物合成过程中的一个重要限速酶,其通过介导炎症因子释放和血管生 成,从而加速关节炎性病变。特异性环氧合酶-2 抑制剂的发现曾为揭示骨关节炎的发病机制 及彻底征服该类疾患点亮希望，但随着 FDA 公布关于 COX-2 特异性抑制剂心血管风险事件 的报告后2004 年 10 月默克公司宣布从中国市场全面撤回万络（Vioxx,罗非昔布）使广大学 者再度重新审视骨关节炎的病理生理机制[4]，倡导应用具有“双改性” （同时改善症状改良结 构）的治疗方法。 1. 材料与方法 1.1 标本来源及临床资料 选取西安交通大学医学院第一附属医院 1999 年 1 月至2004 年 1 月经关节镜及手术切取 的 300 例骨性关节炎病例，去除资料不全病例及合并其它疾病的病例取 150 例用于本研究。 其中男 85 例，女 65 例，男女子比为 1.31：1；年龄34-73 （平均56.5±11.7 ）岁。 1.2 免疫组化染色 石蜡标本 4um 连续切片，干燥箱，冷却,脱蜡，逐级脱水，洗涤后，抗原修复（具体参 照试剂盒说明）。过氧化物酶阻断液,室温下孵育。PBS 液冲洗，加去免疫性动物血清，室温 下孵育。甩去血清，分别加 COX-2 一抗， MMP-3 一抗， TIMP-1 一抗，置湿盒中室温下 -1- 孵育。加生物素标记的二抗，室温下孵育，加链酶菌抗生物素—过氧化物酶溶液，室温下孵 育。加新鲜配制的 DAB 显色液，显微镜下观察显色。清水冲洗，苏木素复染。酒精梯度脱 水干燥二甲苯透