超声波对几种常见肠道致病菌杀灭效果及其作用机理的探讨.pdfVIP

产生的瞬时高温及温度变化和瞬时高压与压力变化，导致微生物菌体细胞壁和细胞膜破坏， 胞质溶出，空化效应产生的同时还会激发产生大量的自由基，均可达到细菌致死和病毒失活 的效果lZ—J。郁世芳f4】和张文福【5】的研究表明，超声波与化学消毒剂具有明显的增效作用， 朱绍华∞1将超声波应用于酱油灭菌后，细菌总数指标达到合格。本文旨在研究不同频率超声 波处理对常见肠道致病菌的杀灭作用。对超声波杀菌机理和应用于巴氏灭菌过程增强灭菌效 果的可行性进行探讨。 2．材料与方法 2．1实验材料与设备 2．1．1实验材料 1．指示菌株：大肠杆菌078(Escherichiacoli078)、沙门氏菌C．79(Salmonella sp．C．79) aureus C58000)由华南农业大学食品学院微生物 和金黄色葡萄球菌C58000(Staphylococcus 实验室保存。 209，pH7．2～7．4，121℃灭菌20min。配制时不加入琼脂则制成营养肉汤。 2．1．2实验仪器 供。扫描电镜：FEI．XL30环境扫描电子显微镜(philips)。 2．2实验方法 2．2．1菌种制备：各取大肠杆菌078、沙门氏菌C．79、金黄色葡萄球菌C58000斜面菌 苔一环，分别转接至斜面培养基，37℃恒温培养24h得到活化菌种。将活化菌种分别接种于 装有约100mL牛肉膏蛋白胨培养基的三角瓶中，37℃振荡培养24h。用移液器(枪头经灭 菌)从三角瓶中吸取1000“L菌悬液离心后，倒掉上清，用100011L无菌生理盐水洗涤后， 再离心，如此反复洗涤三次后，用1000皿生理盐水重悬浮后，梯度稀释制成10。3稀释度的 样品液，使充分混匀后待用。 2．2．2超声波处理致病菌的方法：吸取10’3稀释度的菌悬液lml注入已灭菌的试管中， 然后将试管置于超声波清洗机的水槽中进行处理，每个样品分别做三个平行。 2．2．3残留活菌数量的测定及致死率计算 从经超声波处理过的试管中吸取lOOul稀释后的菌悬液注入盛有900ul无菌水的已 灭菌的离心管中，振荡，使充分混匀。以此类推制成lO。4、l0．5、lO石、lo．7各种稀释度的样 品溶液。再分别吸取100ul 10一、106、10。7稀释度的样品稀释液对号注入已灭菌的培养皿， 然后再倒入灭菌后冷却到45C左右的牛肉膏蛋白胨培养基中，边倒入边缓慢摇动，使样品 中的微生物与培养基混合均匀，每个稀释度倒3个平皿，待冷凝成平板后，倒置于37C左 右的恒温培养箱培养24h，待长出单菌落后。用菌落计数器进行计数。 同样方法吸取10～、lO西、lO。7稀释度的对照组样品稀释液(水浴)做成平板，进 行菌落计数。 致死率=(1．超声波处理后活菌总数／对照样的活菌总数)×100％ 2．2．4SEM观察 样品和对照样品的菌体超显微形态。 3．结果与讨论 3．1超声波发生器频率对杀菌效果的影响 由图l可见，大肠杆菌078对超声波处理最敏感，超声波频率为28kHz时杀菌效果最 对沙门氏菌C一79的致死率次之，33kHz时致死率最高，为32％；而金黄色葡萄球菌C58000 对超声波处理不敏感，38kHz处理时，致死率为．1．8％，表现为促进了C58000菌株的繁殖。 ／-、 誉 、-， l 瓣 献 遴 隧 旃 霍 霾鬟 的蛎如孙∞弱加坫m I 霾隧 5 盈凇 ll _％ l—震1一． L———， O巧 078 C一79