高活性纤维素酶地研究.pdfVIP

维普资讯 高活性纤维素酶的研 舡搠 术服神 嚣 素 瑞 酶作为饲料添加剂是为了补充动物 内源 1．3．1 紫外线诱变 ：用生理盐水制备各种菌 酶的不足，促进动物对饲料的消化吸收，提高 株的 l0 个 ／IrI1的孢子悬液，取 5ml孢子悬液 饲料利用率 ，从而可提高动物生产性能，在 8O 于 7cm的培养皿中，磁力搅拌下在30W 紫外 年代末被称为第三代新型饲料添加剂。我国动 灯下，距离 15cm照射 l一5分钟。 物饲料多以植物性原料为主，纤维素物质含量 1．3．2 亚硝基胍诱变：取 lml孢子悬液加入 高，因此纤维素酶的应用十分重要。我国对纤 等量的600r／ml(pH6．0)的亚硝基胍，混匀，室 维素酶的研究虽有几十年的历史，但 由于纤维 温处理30—60分钟，稀释 100倍，中止反应 素酶活性不高，用量过太 ，致使生产成本过高 1．4 分析测定方法 而应用受限。因此选育高活性的纤维素酶是我 1．4．1 粗酶液的制备 ：成熟酶 曲加 lO倍水 ， 国酶制荆研究的一项主要任务。本研究以纤维 3O℃浸提 1小时，过滤，3000rpm离心+上清液 素酶活力为主要指标，以半纤维素酶、果胶酶 即为粗酶液 - 等为参考，筛选出了饲用复合酶高产菌株 ，并 1．4．2 酶制剂的制备：粗酶液 以7O 的纯酒 对其发酵条件进行了研究。 精浓度沉淀2小时，3000rpm离心，沉淀经自然 1 材料与方法 风干，粉碎即得粗酶粉。 1．1 菌株 1．4．3 滤纸酶活 (FPA)：适当稀释的酶 {戎和 究 原始菌株：里氏木霉 A 0．2M、pH4．8的醋酸缓冲液共 2ml，加入 50士 突变菌株：里氏木霉 91—3 lmg的滤纸条 (约 1×6cm)一片，50V酶解 l小 对 比菌株：里氏木霉 QM9414 时。 里 氏木霉 Rut—C一3O 1．4．4 棉花酶活 (C)；以 50士lmg的脱脂棉 黑曲霉B。 代替滤纸+5O℃酶解 24小时。 1．2 培养基和培养方法 1．4．5 羧甲基纤维素酶活 (C)：lml适当稀释 1．2．1 试管斜面培养基：马铃薯琼脂培养基 。 的酶液加 lml用 0．2M、pH4．8的醋酸缓冲液配 广、／ 1．2．2 纤维素双层平板：一种筛选高活性纤 制的 1 的CMC--Na溶液，50℃酶解 l0分钟。 维素酶产生苗的方法。 1．4．6 口一葡萄糖苷酶活：以 1 的水杨素溶液 1．2．3 固态发酵培养基；玉米秸秆粉 t麸皮 代替 l％的CMC--Na溶液，50℃酶解30分钟。 一 7：3+硫酸铵 4％+磷酸二氢钾 b．4 ，硫酸镁 1．4．7 半纤维素酶活：以 1 的木聚糖溶液代 O．1 ，3倍水，自然 pH。 替1 的水杨素溶液，5O℃酶解 3O分钟 。 1．2．4 培养条件：2j0 三角瓶装 2。g培养基 1．4．8 果胶酶活 ：以 1 的果胶溶液代替 1％ (含基料 5g)，接种 lml各种菌株的孢子悬液， 的水杨素溶液，50℃酶解 30分钟。 3O℃培养 4天 。 1．4．9 淀粉酶活：以 1 的可溶性淀粉代替 1．3 诱变方法 1 的水杨素溶液 ，50℃酶解 30分钟。