分子生物学重点xiaochao.docVIP

试述生物芯片的概念、制作流程及应用 概念:生物芯片是近年来在生命科学领域中迅速发展起来的一项高新技术,主要是指通过微加工技术和微电子技术在固体芯片表面构建的微型生物化学分析系统,以实现对细胞.蛋白质.DNA及其它生物组分的准确.快速与大量信息的检测。制作流程:芯片方阵的构建;样品制备;生物分子反应;信号的检测及分析应用。可在基因组水平进行基因表达和发现研究、突变、序列测定等,已广泛应用于基因组研究和人类疾病的诊断等多领域 简述转录的基本过程 ①模版的识别:RNA聚合酶与启动子DNA双链互相作用并与之结合②转录的起始:RNA聚合酶使DNA双链解旋,形成转录泡,促使底物核糖核苷酸与模版DNA碱基配对,转录的起始就是RNA上第一个核苷酸键的产生③转录的延伸:RNA聚合酶释放6因子,RNA聚合酶沿链向下移动,RNA不断合成,直至终止子④转录的终止:RNA聚合酶识别终止子,RNA-DNA杂合物分离,转录泡瓦解,DNA恢复双链状态,RNA聚合酶和RNA链从模板释放出来 真核基因表达调控的基本过程 (1)DNA水平的基因表达调控①染色质状态:a.活性染色质;b.非活性染色质;c.修饰作用与染色质状态;组蛋白的乙酰化;组蛋白的甲基化;DNA的甲基化②DNA结构:a.基因的丢失b.基因的扩增c.基因的重排与变换d.DNA的甲基化 (2)转录水平的基因表达调控①顺式作用元件:a.启动子b.增强子c.绝缘子d.转座子②反式作用因子:DNA识别或结合域、转录激活域 (3)转录产物的加工转运调控①RNA的切割和加polyA改变基因编码的蛋白质②RNA的不同剪接和编辑使用同一基因转录产生不同的蛋白质③RNA从核中转运到细胞质的过程受控制 (4)翻译水平的基因表达调控①mRNA的稳定性与基因表达调控②mRNA5’前导序列对翻译水平的影响③翻译起始因子的磷酸化可抑制或选择性地加强蛋白质的合成④mRNA3’端的结构对翻译速率和mRNA寿命的影响⑤真核生物mRNA翻译起始的控制⑥翻译延伸过程对蛋白质合成的影响⑦微小的干扰RNA对mRNA翻译的负调控⑧蛋白质的加工折叠转运的调控 乳糖操纵子的结构及其正负调控机制 乳糖操纵子包括3个结构基因:Z,Y,A.以及启动子、控制子和阻遏子等。 正调控机制:调控因子通过与启动子元件结合来激活基因的表达。cAMP-CAP复合物与DNA结合改变DNA次级结构,促进RNA聚合酶结合区的解链。Camp-CAP通过与RNA结合再与DNA结合,促进RNA聚合酶与启动子的结合,从而增强转录。Camp-CAP复合物的形成取决于细胞内cAMP浓度。当以葡萄糖为能源时,葡萄糖中间代谢产物抑制AC活性(ATP不能分解产生cAMP(细胞内cAMP浓度低(无cAMP与CAP结合使CAP激活(不能激活乳糖操纵子启动子区(乳糖操纵子结构基因不转录 负调控机制:阻遏物与操纵基因结合来阻止基因的表达。具有活性的阻抑物只要结合在操纵基因上,就可以阻扰RNA聚合酶的转录活动,这是由于P和O有一定重叠序列,O被阻抑物占据后,RNA聚合酶不结合P。阻抑物有无活性受诱导物影响。培养基中加入小分子诱导物(阻抑物失活(阻抑物不能与操纵子系列结合(结构基因表达 蛋白质合成的生物学机制 ①氨基酸的活化:AA在氨酰-tRNA合成酶的作用下利用ATP生成活化氨基酸AA-tRNA②翻译的起始:蛋白质合成的起始需要核糖体大小亚基、起始RNA和几十种蛋白因子的参与,在模板mRNA编码区5’端形成核糖体-mRNA起始tRNA复合物并将甲酰甲硫氨酸放入核糖体P位。③肽链的延伸:Ⅰ后续AA-tRNA与核糖体结合:第二个AA-tRNA在延伸因子及GTP的作用下生成复合物,然后结合到核糖体的A位点,水解GTP产能释放延伸因子Ⅱ肽键的形成:在肽酰转移酶的作用下,A位上的AA-tRNA转移到P位,与fMet-tRNAfMet上的AA生成肽键Ⅲ移位:核糖体向mRNA3’端方向移动一个密码子④肽链的终止:释放因子与终止密码子结合,水解P位上的多肽链与tRNA之间的二酯键,此时,新生成的肽链、tRNA从核糖体上释放,核糖体大小亚基解体,蛋白质合成结束。⑤蛋白质前提加工:ⅠN端fMet或Met切除Ⅱ二硫键形成Ⅲ特定氨基酸的修饰Ⅳ切除新生肽链中的非功能片段⑥蛋白质的折叠:形成高级结构或分子伴侣的帮助下正确折叠⑦蛋白质合成的抑制剂:主要是一些抗生素对蛋白质合成的抑制 Aor激活剂ase琼脂糖ap碱性磷酸酶ale等位基因atRNAse氨酰trna合成酶ang退火ady抗体aon反密码子aen抗原aDNA模板DNAane反义基因aor衰减子 Bss回交bon回复突变BAC细菌人工染色体bel本底水平bng碱基错配bp碱基对bip生物芯片Bend平端 CoxC值悖理cma中心法则cre着丝粒cne分子伴侣ctDNA