DNA的复制与修复-1.ppt

第十章 DNA的复制和修复 第一节 DNA的复制 ——DNA指导下DNA的合成 一、DNA的半保留复制  (semiconservative  replication) 2. 意义 二、DNA复制的起点和单位 1. 复制单位（复制子，replicon） 2. 复制起点（origin） 三、复制的方向性 1. 双向复制 四、复制的速度 五、原核生物DNA复制的分子机制 （一）参与复制的主要酶及蛋白质因子 1. DNA聚合酶（ DNA polymerase ） ? DNA聚合酶Ⅰ DNA聚合酶 III 2. DNA连接酶（DNA ligase） 3. 起始因子（initial factor）— DnaA 蛋白 4. 引物合成酶（primase，DnaG蛋白） 5. DNA拓扑异构酶（topoisomerase） 6. DNA解螺旋酶 (helicase)： 7. 单链结合蛋白(single-strand binding protein, SSB) 复制体（replisome） （二） 复制过程 复制的阶段：起始、延伸、终止 1. 复制的起始 2. 复制的延伸 3. 复制的终止 （三） DNA复制的高度准确性 1. DNA聚合酶的双重核对作用。 - DNA聚合酶对底物的选择作用。 - 3?→5? 外切酶活性可及时清除错配碱基。 ? DNA聚合酶II：聚合短链，具3 ’ ? 5’核酸外切酶活性，但无5’ ? 3’外切酶活性，参与DNA修复。 ? DNA聚合酶III是由多亚基组成的蛋白质，是大 肠杆菌中真正负责从新合成DNA的复制酶。 核心酶 夹子装置器 ? 复合物 滑动夹子 核心酶二聚化 DNA polymerase Ⅲ. The complex contains 10 kinds of protein chains. The protein is a dimer because both strands of the DNA duplex must be replicated simultaneously. Sliding clamp subunits Catalytic subunit Catalytic subunit Ribbon diagram of the ? subunit dimer of the DNA polymerase Ⅲ holoenzyme on B-DNA, viewed down the axis of the DNA. The ? subunit dimer of the DNA polymerase Ⅲ holoenzyme on B-DNA. 催化双链DNA切口处5? - 磷酸基和3? - 羟基生成磷酸二酯键。 Mr. 74000，一条肽链。 (NAD+) (NMN+ + AMP) 细菌 DNA连接酶 ATP AMP+PPi 动物、噬菌体 引发体（primosome） 识别并结合在DNA复制的起始位点，以启动复制（需Hu蛋白参与）。 催化合成RNA引物。 引物合成酶 DnaB蛋白 （参与DNA复制的起始阶段） 拓扑异构酶是一类可改变DNA拓扑性质的酶，它将解旋酶作用后产生的扭转张力释放掉。主要有I型和II型，它们广泛存在于原核生物及真核生物中。 (原核生物) 拓扑异构酶Ⅰ（?蛋白）: 能使DNA一条链发生断裂和再连接，反应无需供给能量。消除负超螺旋, 使复制后的DNA恢复正常构象，参与转录。 拓扑异构酶Ⅱ（旋转酶，gyrase）: 能使DNA的两条链同时发生断裂和再连接。引入负超螺旋，消除复制叉前进时的扭曲张力。反应需要ATP供能。 解开DNA双链，每解开一对碱基，消耗2ATP。 Dna B：沿模板链5? →3? 移动，参与复制。 Mr. 75600，由4个相同亚基组成。 作用：结合于DNA单链上，防止分开的单链 重新互补配对和保护单链不被核酸酶 降解。 在DNA合成的生长点上，即复制叉上，分布着各种各样与复制有关的酶和蛋白质因子，它们构成的复合物称复制体。 General features of a replication fork. The DNA duplex is unwound by the action of DNA gyrase and helicase, and the single strands are coated with SSB. Primase periodically primes synthesis on the lagging strand. Each h