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结构基因组学 序列图（Sequence map） 在Sharp和Roberts发现内含子之前 法国的科学家 Chambon 也率领一个小组进行了有关实验: 鸡的输卵管分泌卵清蛋白、卵粘蛋白和伴清蛋白，而其红细胞（鸟类的红细胞上有核的）只合成血红蛋白，那么两种组织之间DNA有什么不同呢？ 于是他们提取两种组织的DNA，分别用酶（EcoR1和HindIII）切成几段，走电泳，再用卵清蛋白mRNA来制备cDNA探针和以上两片进行southern杂交 结果两种组织中的DNA不论用哪一种酶来切，都出现了相同的多条阳性杂交带。 cDNA顺序内并没有EcoRI和Hind = 3 \* ROMAN III的切点，为什么会出现多条阳性带 Berget，Sharp小组和Roberts小组同时发现了腺病毒外壳蛋白六聚体基因（Hexon gene ） 前导区有断裂现象。他们用限制性内切酶EcoRI和Hind = 3 \* ROMAN III分别消解腺病毒的DNA 得到了大小不同的很多片段 分别选择两种酶切片段中的最大的A片段DNA和Hexon的mRNA进行杂交 在电镜下可以观察到EcoRI酶切的A片段的3段可以和上述mRNA形成杂合双链 但在杂合双链的5端逸出3个单链DNA环，说明它们不能和mDNA完全互补 外显子（exon），外元 编码的DNA序列，即被表达的DNA区段 内含子（intron），内元 不编码的DNA序列 Gilbert （1978年）提出内含子、外显子概念 Berget在冷泉港作了有关发现断裂基因的学术报告，提出在Hexon基因内近5端有不编码的部分 Chambon听了报告后便意识到，他们的实验结果也是可以用断裂基因来解释的: 即卵清蛋白的基因上可能有多个断裂区（内含子） 在这些断裂区上有酶切位点的存在，可将卵清蛋白基因切成大小不同的片段，但它们都可以和mRNA进行杂交 事后Chambon(1977,1981)等用Berget的实验方法进行了分子杂交，果然出现了7个单链DNA的环 断裂基因的结构 成熟mRNA或cDNA与对应单链DNA杂交 Total DNA of chicken cDNA 7 DNA loop Chambon was inspired by Berget’s report Berget, S. M., C. Moore, and P. Sharp. 1977. PNAS 74; 3171-3175 用S1核酶处理异源双链分子 核酸酶能专一降解未配对的单链核苷酸，在RNA-DNA异源双链分子中，外显子形成双链而保留，内含子仍为单链被降解. 内含子是如何来的？ 内含子的存在究竟有何意义？ 它担负着什么样的功能？ 内含子又何以能在一些真核生物中非常广泛地分布呢？ 内含子的特点: 1. 内含子和外显子的分布 　 ?真核基因一般都含有内含子，也有少数基因不含内含子，如组蛋白基因，干扰素基因，酵母的多数蛋白质基因 1986年Chu F.K等发现T4噬菌体的胸苷合成酶基因也含有内含子 此外猿猴病毒SV40的T和t蛋白的基因中也含有长度不等的内含子 内含子的特点: 1. 内含子和外显子的分布 　 ?不同的基因其内含子的大小不相同 有的基因内含子少，如珠蛋白基因只有2个内含子， 有的基因内含子很多，如鸡的胶原蛋白（1a2）蛋白基因含有50个外显子 Exon content vs. length 人类基因组计划 Exon content vs. length Exon content vs. length 内含子的特点: 2. 内含子的相对性 　 ? 内含子是相对的，一个基因的内含子可能是另一个基因的外显子 内含子种类: ??I: 内含子可自我剪接,不需任何蛋白质参与,需鸟苷参与 ??II: 内含子的剪接需要蛋白酶的参与，如tRNA ???? III: 内含子的剪接需形成剪接体的形式，除各种蛋白因子外还需各种snRNP的参与 如: I类内含子包括四膜虫rRNA的内含子，几种酵母线粒体的内含子，噬菌体T4胸苷酸合成酶的内含子等。 内含子自1977年被发现以来，逐渐被明确地定义为： 基因中间插着的若干段序列，在RNA转录物水平上经剪接除去，不参与该基因在蛋白质水平上的表达。 内含子起源的两种学说: ，“内含子存在(Introns early)”模型: 内含子与它所在的基因一样古老，在装配第一个这样的基因时，内含子就已存在 早期的内含子具有自催化、自我复制等能力，因此，它们是原始基因和基因组的组织与复制必不可少的部分