DNA的复制与修复-2.pptVIP

（一）参与复制的酶及蛋白质因子 （二）真核生物DNA复制过程 真核与原核生物在复制过程上的相同之处： 2. 真核与原核生物DNA复制一般特点的比较 （三）端粒及端粒的合成 七、生物体DNA复制的基本特点 复制方式为半保留复制。 第二节 DNA的损伤及修复 导致DNA损伤的因素 生物因素： 物理因素： 化学因素： 修复系统 错配修复 直接修复 切除修复 重组修复 倾错修复 （一）错配修复（mismatch repair） 可见光激活光复活酶，其可以分解由于紫外线照射形成的嘧啶二聚体，恢复DNA的正常结构。 （三）切除修复(excision repair) 定义： （四）重组修复 （五）应急反应(SOS)和易错修复 许多可造成DNA损伤或抑制复制的处理均能引起一系列复杂的诱导反应，称为SOS反应。 第三节 RNA指导下的DNA的合成 逆转录作用（reverse transcription） 是以RNA为模板，即按照RNA中的核苷酸顺序合成DNA的过程。 （一）逆转录酶（reverse transcriptase）的发现 1964 年，Temin 提出前病毒学说，即在致癌RNA病毒的感染过程中存在一个DNA中间体（前病毒）。 1970年， Temin和Baltimore分别从致癌RNA病毒中发现逆转录酶。 （二）逆转录酶的性质 活性： RNA指导的DNA聚合酶活力 DNA指导的DNA聚合酶活力 核糖核酸酶H的活力 逆转录病毒的基因组 通常有两条相同的（+）RNA链所组成，在靠近5’端的区域以氢键结合在一起。 5’端具有帽子结构，3’端具有多聚腺苷酸。 靠近5’有1分子宿主tRNA，作为逆转录引物。 典型逆转录病毒基因组长约7000-100000核苷酸，携带3个基因（gag，编码核心蛋白、pol，编码蛋白酶、整合酶、逆转录酶、env，编码膜蛋白)。 基因组RNA的两端具有同样的序列，成为正向重复。 （四）逆转录酶应用与逆转录研究意义 逆转录酶的应用（如：cDNA的获得、逆转录病毒病毒作为信息载体作为基因治疗等） 研究意义： 揭示HIV病毒和嗜肝DNA病毒的致病机理与防治研究 用于分子生物学研究的材料 以4种dNTP为底物 需要有模板和引物 聚合方向： 5??3? 需Mg2+（Mn2+） 数目：70个/ 病毒粒子 结构：含?、?两个亚基 General structure of an integrated retrovirus genome. The long terminal repeats (LTRs) have sequences needed for the regulation and initiation of transcription. The sequence denoted ψ is required for packaging retroviral RNAs into mature virus particles. （三）逆转录病毒生活史: 逆转录病毒进入宿主细胞 在逆转录酶的催化下，以病毒的RNA为模板合成互补DNA（cDNA），形成RNA-DNA杂化体，逆转录酶将杂化体中的RNA降解，同时以剩下的DNA链为模板合成另一条互补的DNA链，结果形成双链DNA 双链DNA整合到宿主DNA中 利用宿主复制和转录机器生产大量的病毒RNA 转录出的mRNA翻译成病毒的包膜蛋白，逆转录酶和壳体蛋白 将病毒RNA、逆转录酶和壳体蛋白组装成病毒的核壳体 核壳体结合包膜蛋白形成完整的逆转录病毒 逆转录酶没有3ˊ-5ˊ外切酶活性或校正活性，所以它的错误率比任何DNA聚合酶都高 + 病毒RNA 侵染宿主细胞 RNA-cDNA杂交分子 RNA指导的DNA聚合酶 - DNA 整合入染色体基因组 DNA指导的DNA聚合酶 - + 双链DNA 逆转录过程 核糖核酸酶H 病毒RNA 自身蛋白质 转录 翻译 + + + + cDNA：几乎所有真核生物mRNA分子的3’末端都有一段polyA,当加入寡聚dT作为引物时，mRNA就可作为模板，在逆转录酶催化下在体外合成与其互补的DNA，称为cDNA。 * 六、真核生物DNA的复制 1. DNA聚合酶：pol ?、?、?、 ?、 ? 1 2 2 1 4 亚基数目 修复 核DNA合成 线粒体DNA合成 修复 引物合成 功能 高 高 高 低 高 准确性 高 有PCNA时高 高 低 中等 持续合成能力 - - - - + 引物合成酶 + + + - - 3’→5’ 外切酶 细胞核 细胞核 线粒体 细胞核 细胞核 位置 ε （II） δ （III） γ （M） ?