几种谷胱甘肽检测方法.pdfVIP

山东食品发酵 专刊专题 2007.3(总第146期） 几种谷胱甘肽的检测方法 陈俭梅1 周 琳2 （1.山东师范大学生科院 济南 250014） (2.山东大学医学院 济南 250014) 摘 要 测定谷胱甘肽含量的方法有多种，目前还没有一种既快速、稳定、特异，又十分灵敏、经济的测定方法。本文对 谷胱甘肽的各种测定方法作一综述。 关键词 谷胱甘肽 检测 GSH存在于所有生物细胞中，而以酵母、谷物 较好，但需用对羟基汞苯甲酸和萤光黄；荧光法容 种子胚芽、人体和动物的心脏、肝脏、肾、红细胞 易受干扰，误差较大；乙二醛酶法需要复杂的技术 [2] 和眼睛晶状体中含量较高。正常人体内还原型谷 和设备 。目前测定谷胱甘肽含量的方法有多种， 胱甘肽和氧化型谷胱甘肽 （GSSG）的比例为100：1， 如酶循环法、比色法、荧光光度法、流式细胞仪法、 全血中GSH的正常浓度约为37.1mg/dl，人体的肝 滴定法、高效毛细管电泳法和近些年发展的高压 脏和肾脏是GSH主要的合成、代谢和排泄器官。谷 液相色谱法等，这些方法各有其优点，但也都有不 胱甘肽的主要生物学功能是保护生物体内蛋白质 足，目前还没有一种 既快速、稳定、特异、又十 的巯基进而维护蛋白质的正常生物活性，同时它 分灵敏、经济的测定方法，谷胱甘肽的测定方法有 又是多种酶的辅酶和辅基。GSH的重要生物学功 待进一步的发展和完善。下面对目前常用的几种 能与谷胱甘肽的分子结构有密切关系，例如GSH 主要的测定方法做一介绍、比较和评价。 分子中的巯基参与中和氧自由基、解毒等重要功 能；所含的γ-谷氨酰胺键能维持分子的稳定性并 1 酶循环法 必参与转运氨基酸；GSH中的甘氨酸和半胱氨酸 其测定原理为氧化-还原反应：GSH被DTNB [1] （5，5′ ′-二巯 残基参与胆酸的代谢等 。 近年来，随着对GSH的生理、生化等方面研 基-2-硝基苯酸）氧化，生成GSSG和稳定的TNB 究的深入，GSH在医学、食品、保健、防衰老等方 (5-thio-2-nitrobenzoic acid；5-巯基-2-硝基苯酸)； 面正引起人们日益广泛的注意。谷胱甘肽 （GSH） GSSG与GSSG还原酶及NADPH（还原型烟酰胺 用途广泛，用基因工程微生物生物合成方法是生 腺嘌呤二核苷酸磷酸)反应,还原生成GSH。在 产谷胱甘肽的主要方式。作为前体之一，半胱氨酸 NADPH与GSSG还原酶维持GSH总量不变的条件 的浓度较高，对谷胱甘肽的测定有干扰。已有几种 下，GSH和DTNB反应生成TNB的速率与样本中 方法用于半胱氨酸存在时谷胱甘肽的测定：酶分 总谷胱甘肽成正比。TNB于412nm波长处有最大 析方法可测高达1000倍半胱氨酸存在时谷胱甘肽 吸光度，可以通过分光光度计来测定总谷胱甘肽 [3] 的含量，结果较准确，但需价格昂贵的辅酶Ⅱ和谷 水平（GSH+GSSG） 。酶法测定谷胱甘肽，样本的 胱甘肽还原酶，并且后者活力变化严重影响测量 制备要迅速，因为GSH很容易氧化而使其浓度降 结果；色谱法冗长费时；Jocelyn采用将样品在硫 低。本法还可测定GSSG水平。 酸中煮沸1h的方法，不太安全；Wronski方法效果 酶循环法最初由Owen和Belcher提出,之后由 -26- Sh andon g F ood Ferment ation 2007.3(总第146期） 专刊专题 山东食品发酵