珍珠菜提取物抗白血病作用及其机制研究_第一部分珍珠菜有效部位的提取_摘要_10_.pdfVIP

第一部分 珍珠菜有效部位的提取（摘要） 为了研究珍珠菜（Lysimachia clethroides Duby ）的抗肿瘤有效部位，通过化学成 分预试验，初步确定珍珠菜可能含有黄酮、皂甙、有机酸、鞣质、糖类及甾体、萜类 等成分，与文献报道一致。在本实验室研究的基础上，采取新的工艺，用乙醇回流提 取、系统溶剂萃取及柱分离等方法提取到了七个活性部位，分别命名为 ZTF1 、ZTF2 、 ZTF3 、ZTF4 、ZTF5 、ZTF6 、ZTF7 ，并用紫外分光光度法测定各部位有效成分含量。 采用药效学跟踪法对各个成份进行筛选，得到有效部位 ZTF4 。为了减少给药剂量， 提高药效，改进提取工艺，对 ZTF4 进一步纯化，使其含量由 22%提高到 35% 以上， 得到 ZE4 ，其药效具体结果见第二部分。 4 第二部分 ZE4 的体内外抗白血病作用 以体外培养的人慢性粒细胞白血病细胞株K562 细胞为靶细胞，进行细胞毒实验， 然后在测定 ZE4 急性毒性的基础上，建立 L1210 动物移植性肿瘤模型，进行小鼠体内 抗白血病实验 第一节 ZE4 的体外抗白血病作用研究 用体外培养细胞系作抗肿瘤药物筛选具有用药量少，周期短，费用低等优点，此 外，体外筛选结果与体内试验的相关性好，已被广泛作为一种常规的抗肿瘤药物的初 筛手段。目前，国内外文献尚未见珍珠菜提取物的体外抗白血病报道。为了观察珍珠 菜提取物的抗肿瘤作用，本文进行了 ZE4 对人白血病 K562 细胞增殖影响的研究。 材料与方法 1. 药物与试剂 1.1 药物： 珍珠菜药材采用醇提水沉法提取后，浓缩至一定浓度，经大孔吸附树脂分离纯化， 进行体外筛选得到的活性部位（ZE4 ），其中总黄酮含量为 33.35 ％，批号2005071201 1.2 主要试剂： 注射用盐酸多柔比星 （DXR ），深圳万乐有限公司，批号 0505E1 ；噻唑蓝 （MTT ）， 3H-TdR ，购自上海 SIGMA 分装，批号 3329A28 ；SDS，SIGMA 分装，批号：0106 ； 原子能研究所；PRMI 1640 （含L-谷氨酸，不含 NaHCO ），Gibco 公司；新生小牛血 3 清，杭州四季清生物材料研究所 2. 仪器 CO2 孵箱，HeraeusBB16UV 型，Heraeus 公司； 倒置显微镜，XDS-1B 型，重庆 光学仪器厂；酶联免疫测定仪，DG-3022 型，国营华东电子管厂。液体闪烁测量仪， Wallac 1409 型，瑞典法码西亚公司生产 5