类橡胶蛋白AbAMP1的重组表达及其抑菌活性研究.pdfVIP

维普资讯 微 生物学通报 JAN20，2008，350)：5-9 M icrobiology 02008byInstituteofM icrobiology，CAS tongbao@im．ac．cn 类橡胶蛋白AbAMP1的重组表达及 其抑菌活性研究 邓名荣 龙良鲲 朱红惠p 曲新勇2 (1．广东省微生物研究所 广东省菌种保藏与应用重点实验室 广州 510070) (2．澳大利亚环宇生物反应器有限公司 澳大利亚) 摘 要：将类橡胶蛋 白 AbAMPI基 因克隆至 pPIC9，获得重组载体 pPIC9一Ab，线性化后转化 PichiapastorisSMDl163，筛选获得 阳性转化子。取表型为 Mut的转化子 Asl6进行诱导表达，上 清经Tricine—SDS—PAGE分析，在约4．7kD处有一条较强主带，与AbAMPI的预期大小相符，表明 获得高效表达。上清经酸性非变性电泳后，用凝胶琼脂糖弥散法测定其抑菌活性，在含 Bacillus thuringiensis琼脂糖平板AbAMPI对应处有一明显抑菌带，说明重组表达的AbAMPI具有天然活 性。上清液抑菌活性试验显示，AbAMPI对 Fusariumoxysporumf．sp．cubense以及B．thuringiensis， B．subtilis，Staphylococcusaureus等G细菌均有显著的抑制作用，而对其它供试丝状真菌、酵母菌 以及 G细菌无明显抑制作用。 关键词：类橡胶蛋白，AbAMPI，重组表达，抑菌活性 RReeccoombiinnaannttExprreessssiioonnaanndAAnnttlimm liccrroobiaallAAssssaayyOoft Hevein—likePeptideAbAM P1 DENGMing—Rong LONGLiang—Kun ZHUHong—Hui QUXin—Yong (1．GuangdongInstituteofMicrobiology，GuangdongProvincialKeyLaboratoryofMicrobial CultureCollectionandApplication，Guangzhou510070) (2．HuanYuBioreactorCo．Ltd，Australia) Abstract：Thegeneofhevein—likepepfideAbAMP1wascloned intothevectorpPIC9successfully．After linearizedwithrestrictionenzymes，therecombinantplasmidpPIC9一AbwasWansofrmed intoPichiapas— torisSMD ll63bvelectrotransformation．ThetransformantswerescreenedonMD platemedium，andthen identifiedusingPCR method．ThetransformantASI6withMut phenotypewasusedforinducingexpres— sionandotherassays．A proteinbandofabout4．7kD wasdetectedonthegelbyatricine—SDS—PAGEanaly— sisofinducedculturesupernatant．whichindicatestheproteincontentofthesupernatantofcultureafter72h inductionarealmostthetragetp