纳米荧光小球标记在蛋白质微阵列检测中的应用研究.pdfVIP

第! 卷 分析化学 （()*+, -./+.) ）’ 研究报告 第 期 #$$% 年 月’ ’ ’ ’ ’ ’ ’ ’ ’ ’ ’ 0123454 67893:; 7 /3:;=2?:; 014@259= ’ ’ ’ ’ ’ ’ ’ ’ ’ ’ ’ A##B C A#!$ 纳米荧光小球标记在蛋白质微阵列检测中的应用研究 A A，# A A A ! A，# # 刘海波 ’ 庄峙厦 ’ 陈成祥 ’ 黄荣夫’ 谭 芳’ 鄢庆枇 ’ 王小如 A （厦门大学化学化工学院化学系，现代分析科学教育部重点实验室，厦门!%A$$D ） # （国家海洋局第一海洋研究所，青岛#%%$%A）’ ’ ! （集美大学水产学院，厦门!%A$$B ） 摘’ 要’ 研究了不经分离、一次性制备氨基化联吡啶钌掺杂的双层二氧化硅纳米小球的方法。实验证明该纳 米小球尺寸均匀，光稳定性、水溶性好，分散稳定。通过简单的偶联反应后，它能有效的和蛋白质结合，结合后 的蛋白能保持其生物活性。以此纳米荧光小球为标记物，应用于蛋白质微阵列的定量检测，结果发现其效果 明显优于相同条件下以异硫氰酸荧光素（(,E0 ）为标记物的定量结果，检出限可以达到!F D @GH I 。 ’ 纳米荧光小球，蛋白质微阵列， 关键词 蛋白检测 ! 引 言 蛋白质是人类一切生命活动的基础，是生命科学研究中的重要领域之一。近年发展起来的蛋白质 微阵列技术，因具有高通量、微型化、能系统研究生物体系表达蛋白质的功能及相互作用的特点，使其在 蛋白质组学研究、疾病诊断以及药物筛选等领域发挥着重要的作用［A］。蛋白微阵列由于点样绝对量极 少，荧光信号很弱，要求高灵敏检测器的同时，急需寻找高灵敏度探针。纳米荧光小球具有易于制备，表 面可修饰功能基团，并可掺杂大量荧光物质而显著提高灵敏度，同时它能够克服传统荧光探针光稳定性 不好、亮度不高的缺陷［# ］，已被成功用于分子诊断和分子生物学领域。不经分离，一次性制备了水溶性 好、表面氨基化、联吡啶钌掺杂的双层M2N# 纳米荧光小球。实验证明该小球尺寸均匀，光稳定性好，分 散性好，并能通过简单的反应，有效的与蛋白结合。将该纳米荧光小球作为蛋白微阵列的标记探针，显 示出明显的优势。 # 实验部分 # F ! 仪器和试剂 O294P 012QR9249ES 07@Q:? 5=54@ 芯片点样系统（加拿大O,TE)U 公司）；-2:?1JA$$ 透射电子显微 镜（日本-2:?1 公司）；激光共聚焦生物芯片扫描仪（美国V:?P:9W X27M?243?4 公司）；T(JD!$ AV0 荧光光 谱仪（日本M12@:WY8 公司）；台式冷冻离心机（德国 -42?1 公司）；生物培养箱（常州国华仪器厂）； SIJ$# 定时恒温磁力搅拌器（上海浦江分析仪器厂）。羊抗兔,GZ 、鼠,GZ 、羊抗兔,GZJ(,E0 抗体（华美 生物工程公司）；对应的兔抗血清由集美大学水产学院微生物实验室提供；牛血清白蛋白（北京元亨圣 马生物技术研究所）；!J氨丙基三乙氧基硅烷（M2G@: 公司）；联吡啶钌（/;W92?1 014@2?:; 公司）；（!J羟基 硅基）丙基甲基磷酸酯 （Z4;45 公司）；正硅酸乙酯、曲拉通、吐温#$ 、乙醇、戊二醛、AJ氯甲基萘、氯化钠、 磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、吡啶等其他试剂均为国产分析纯试剂；水为超纯水（ AK S! ·?@ ）。 VXM （$ F $ A @7;H I ，Q- B F ）溶液配制：先称!AF #$ G *:- VN ·#- N 和B AF %!# G *: -VN 分别加 # # # 水充分溶解定容至A$$$ @I ，得到储备液/（$ F # @7;H I *: