脂质体介导转染法原理及其研究进展.pdfVIP

China ⑧,tll习t禽2005年第27卷第7期 PoultryV01．27,No．Z2005 及其研究进展 周雪雁1，关伟军2 (1．山西农业大学，山西太谷030801；2．中国农业科学院畜牧所，北京100094) 脂质体也称人工细胞膜，是由脂质双分子层 多为二油酰磷脂乙醇胺(DOPE)，其中阳离子脂 组成的，磷脂分子在水中可自动生成闭合的双层 类起主要作用，通过静电作用与DNA形成DNA一 膜，从而形成一种囊状物被称为脂质小体。最初 脂复合体，并引导DNA进入细胞，DOPE起辅助作 人们只是运用脂质体模拟膜的构造及功能，从而 用，去稳定脂质和胞内促DNA释放，称为辅助脂 发现了膜的融合及内吞作用。最早证明脂质体能 类。 把DNA十分有效地引入动物细胞的实验是从鼠／ 阳离子脂质体主要分为三类：①人工合成的 人杂种细胞系(HGPRT一)中分离出的中期染色体阳离子去垢剂与DOPE组成，它有两条疏水碳氢 包裹到脂质体中，并用以转染HGPRT一的细胞，结 果转化率比裸露染色体高十多倍，而且转化子能 然脂，经过修饰接上一个阳离子基团与DOPE组 稳定地表达HGPRT一的活性。脂质体法具有很多成，如胆固醇共价接一个二甲基乙基甲酰铵或磷 优点，操作简便，转化效率比较高，可以用于瞬时 脂酰胺接聚赖氨酸或多胺。⑧天然碱性脂与 转染，也可以用在永久表达系的建立，对细胞类 DOPE组成，如硬脂胺SA为已知的唯一纯天然的 型的运用面广，对转染的核酸类型和分子量有很 脂类。 高的包容性，细胞毒性小，也可以用于体内的基 1．2脂质体的制备方法 因转染。因此脂质体转染法得到了越来越广泛的 脂质体的制备主要有超声波法、磷脂酰丝氨 应用。 酸Ca2+离子融合法和逆相蒸发等，用超声波法可 1脂质体的组成和制备 制备的单层或多层脂质小体能向细胞内引入的 1．1脂质体的组成 物质量少，故常用后两种方法制备大的脂质体。 磷脂是一种双亲脂分子，在水环境中可自发 2脂质体介导转染的机制 地形成双层膜，Bangham首次鉴定了呈微球形的 阳离子脂质体表面带正电荷，能与核酸的磷 脂类双分子层。制备脂质体的主要材料是天然磷 酸根通过静电作用，将DNA分子包裹入内，形成 脂和类固醇，因而是生物可降解的、无毒的和不 DNA一脂复合体，也能被表面带负电荷的细胞膜 致免疫的。 吸附，再通过融合或细胞内吞作用偶尔也通过渗 不同组成的脂质体其表面电性不同，表面电 透作用，将DNA传递进入细胞形成包涵体或进入 荷的脂质体对细胞的转染频率也会有差别。现有 溶酶体。 商品化脂质体均为阳离子脂类与中性脂类的复 内吞后的DNA一脂复合体在细胞内形成的包 涵体，在DOPE作用下，细胞膜上的阴离子脂质因 合体，女[1Lipofect，AMINE，Lipofectin等，中性脂类 收稿日期：2004-03—18 膜的去稳定而失去原有的平衡扩散进入复合体， ——43—— 万方数据 China 鱼塑丛竺!竺∑●p Poultry 与阳离子脂质中的阳离子形成中性离子对，使原 亲多肽介导的转染，如在短杆菌肽S与DOPE混合 来与脂质体结合的DN