同型半胱氨酸对人血管平滑肌细胞5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶.pdfVIP

同型半胱氨酸对人血管平滑肌细胞 5，10－亚甲基四氢叶酸还原酶 基因启动子甲基化修饰及mRNA表达的影响# 王丽珍 张敬各 王树人* 四川大学华西基础医学与法医学院病理生理学教研室，成都 610041 [摘 要] 目的：探讨同型半胱氨酸（Hcy ）对人血管平滑肌细胞（HVSMCs ）5， 10－亚甲基四氢叶酸还原酶（MTHFR ）基因启动子甲基化修饰及其mRNA 表达的影响， 以了解其在动脉粥样硬化发病中的可能作用。方法：正常人脐动脉血管平滑肌细胞体外 培养，在培养基中加入临床高 Hcy 血症相关浓度及极高浓度的 Hcy (0,30,100,200,500, 1000μmol/L) ，并孵育 72h，以甲基特异性 PCR(MS-PCR)分析 MTHFR 启动子区域甲基 化状态，采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定 5，10－亚甲基四氢叶酸还原酶mRNA （MTHFR mRNA ）的表达水平。结果：不同浓度 Hcy 处理人血管平滑肌细胞后，其 MTHFR 基因启动子区域出现去甲基化，甲基化水平明显降低。RT-PCR 结果显示MTHFR mRNA 表达增加。结论：Hcy 可促进人血管平滑肌细胞 MTHFR 启动子区域去甲基化， 并使 MTHFR mRNA 表达增加。由于 MTHFR 是促使 Hcy 转化的关键酶，高 Hcy 诱导 的 MTHFR 基因启动子区去甲基化，并进而使其 mRNA 表达增加的效应应是一种代偿 性的 epigenetic 调节反应。 关键词 同型半胱氨酸 5,10 －亚甲基四氢叶酸还原酶 DNA 甲基化 动脉粥样 硬化 Demethylation in the promoter region of MTHFR gene and its increased mRNA expression in cultured human vascular smooth muscle cells induced by homocysteine WANG Li Zhen ZHANG Jing Ge WANG Shu Ren* West China college of preclinic Medical Sciences and Forensic Medicine, Sichuan University, Chengdu 610041 [Abstract]Objective To investigate the effect of homocysteine(Hcy) on the methylation modification of 5,10-Methylenetetrahydrofolate reductase(MTHFR) gene promoter and its mRNA expression in cultured human vascular smooth muscle cells(HVSMCs)，in order to clarify its possible role in atherogenesis. Methods HVSMCs from umbulical arteries were isolated and cultured in DMEM/F12 medium, clinic-relevant and very high homocysteine concentrations (0,30,100,200,500,1000μmol/L) were added for 72h treatment. Methylation-specific polymerase chain reaction(MS-PCR) was performed to catal