膀胱癌细胞p16抑癌基因失活的研究.pdfVIP

维普资讯 安徽 医科 大学学报 ActaUniversitatisMedicinalisAnhui 2003Aug；38(4) ·249 · ◇基础 医学研 究◇ 膀胱癌细胞 p16抑癌基因失活的研究 鲁文胜 于德新 周 青 方卫华。 汪 渊 摘要 目的 探讨膀胱癌 中 p16基 因失活情况 。方法 采 医院泌尿 外科 提供 ，标 本取 出后 15min内经液 氮速 用 PCR、PCR—SSCP和 DNA 甲基化分析技术等方法对 25例 冻 ，一80C保存备用 ；引物 由上海博亚生物技术公司 膀胱癌组织 中p16基 因进行检测 。结果 25例膀胱癌标本 合成 ；氯仿 、无 水 乙醇 (上海试 剂厂)、蛋 白酶 (Sig— 中有 6例存在 p16基 因纯合性缺失 ，缺失率为 24 ；无 1例 ma)、平衡酚 、限制性 内切酶 、TaqDNA 聚合酶 (华 出现 点突变 ；16例 出现异常 甲基化 ，检 出率 为 69．6 (16／ 美试剂公司)、DMSO(Sigma)、琼脂糖 (日本进 口分 23)。结论 外显子 2的纯合性缺失在安徽 区域发生 的膀胱 装)。 D 癌 中可能不是一个较频繁发生 的事件 ；通过 CpG 岛异常 甲 1．2 提取 DNA 取标本组织块 0．3～0．5cm。，加 基化失活可 能是膀胱癌 p16基 因失活 的主要机制 。 D DNA抽 提 缓 冲 液 (100mmol／INaCl，1mmol／L 主题词 膀胱肿瘤 ；基 因 。pl6 EDTA 。0．5％ SDS。50mmol／ITris—HCl，PH 8． 中 图分类号 R737．14；R394；R329．2 C 0)碾碎 ，经蛋 白酶 K消化 ，酚 ／氯仿 抽提 ，乙醇沉 淀 ， 文献标识码 A 文章编号 1000—1492(2003)04—0249一O4 1×TE缓 冲液 (10mmol／L Tris+HC1，1mmol／I 1994年 4月 ，美 国圣地亚 哥和盐湖城 的两个研 EDTA)溶解后 ，紫外分光光度计检测其浓度及纯 究小组同时报道 了一个新 型抑癌基 因 MTS1(mul— 度 ，OD260nm／OD280nm 比值 应在 1．8～2．1之 D tipletumorsuppressor)，MTS1基 因位 于 9p21—22 间 。 区 ．它表达 16ku蛋 白分子 (pl6蛋 白)，故称为 p16 1．3 p16基因缺失检 测 用 PCR法扩 增 p16基 因 D 基因。。p16蛋 白可直接抑制细胞周期依赖性激酶 外显子 1和 p16基 因外 显子 2。其 引物序 列分别 为 ：Exonl(S)GAAGAAAGAGGAGGGGCTG； 4(CDK4)，阻 断细胞周期进程 而抑制癌细胞 的生 C (AS ) GCGCTACCTGATTCCAATTC。 Exon2 长 。本课题组先前 的研究表明 pl6基因