绵羊体外受精技术条件优化的研究.pdfVIP

维普资讯 动物医学进展 。2008，29(6)：24-27 ProgressinVeterinaryMedicine 绵羊体外受精技术条件优化的研究 段明军 ．一，陈静波 ， ，海里且木。，董 红 ，叶晓芳 ，王慧伟 (1．石河子大学动物科技学院，新疆石河子 832003；2．新疆畜牧科学院畜牧研究所 ，新疆乌鲁木齐 830000) 摘 要：探讨 了卵泡液、受精时间和季节对绵羊卵母细胞体外培养效果的影响。从屠宰场采集羊卵巢， 抽取卵巢表面2mm～6mm 的卵泡卵母细胞，进行体外成熟培养；卵母细胞成熟后，与处理后的精子共 同培 养进行受精。结果表明，在卵母细胞成熟培养液 中添加绵羊卵泡液(SFF)组的卵裂率和囊胚发育率均优于 添加 同等浓度 的牛卵泡液 (BFF)组 ；受精 22、18、12h组的卵裂率分别为 64．85 、54．39 、48．72 ，受精 22h和 18h组间差异显著 (PO．05)，受精22h组和 12h组间差异极显著 (PO．01)。秋季绵羊体外受 精的卵裂率和囊胚率均高于夏季，差异显著 (Po．05)，但秋季与春季相比差异不显著 (P0．05)。因此， 进行绵羊卵母细胞体外成熟培养时，培养液 中添加 SFF；受精时，精卵共培养时间为 22h的效果较好。在绵 羊的繁殖季节秋季进行体外受精较春季和夏季的结果好。 关键词：卵母细胞；体外成熟；体外受精；卵泡液；季节；绵羊 中图分类号 ：$814．8 文献标识码 ：A 文章编号 ：1007—5038(2008)06—0024—04 近年来，牛体外受精 (nivitrofertilization， 1．3 卵泡液制备方法 IVF)技术已逐步完善，有望解决优 良胚胎来源匮乏 用 5mL注射器抽取卵巢表面的卵泡 (羊为 的问题，并可降低胚胎移植成本，但绵羊体外受精技 6mm以上，牛为 8mm 以上)，将获得的卵泡液用 术还存在许多问题亟待解决。绵羊体外受精技术始 10mL无菌离心管 以3000r／min离心 3min，吸取 于20世纪 60年代 ，经过 国内外学者长期的研究，直 上清液，过滤，置一20℃储存备用。 到 1985年，才由日本学者花 田章等获得绵羊体外受 1．4 卵巢与卵母细胞采集和卵母细胞体外成熟培养 精后代[1]。绵羊卵巢卵母细胞体外成熟 (invitro 绵羊卵巢采 自乌鲁木齐市华凌畜牧基地屠宰 maturation，IVM)及体外受精相关的影响因素有待 场。绵羊屠宰后立即取下卵巢，置于 38℃的灭菌生 进一步探讨。本试验分别对卵泡液、受精时间和季 理盐水(含 100单位／mL青霉素和 100单位／mL链 节等影响因素进行研究，以优化绵羊卵母细胞 IVM 霉素)中保存，2h～6h运回实验室。用38℃的灭 和 IVF体系。 菌生理盐水清洗卵巢 3次～5次，用连有 12号针头 1 材料与方法 的 10mL注射器抽吸卵巢表面直径为2mm～6mm 1．1 仪器设备 卵泡。将抽取的带有卵母细胞 的卵泡液置于直径 二氧化碳培养箱(德国Heraeus，RS232)，体视 60mm的平皿 内静置，拣卵，选择包有 1层 以上的颗 镜(北京泰克)，电子天平 (HANSEN，HR一182)，倒 粒细胞未扩展且胞质均匀 的卵丘一卵母细胞复合体 置显微镜 (Olympus，IX71)，超纯水仪 (德国申功)； (cumulus—oocytecomplexes，COC)进行体外成熟培 35mm塑料培养皿、24孔培养板和 96孔培养板 由 养。羊卵母细胞体外成熟使用直径为 35mm 的细 Nune公司生产 。 胞培养皿 ，培养液量为 2mL。卵母细胞成熟培养液 1．2 试剂 为 TCM199+100mL／L，卵泡液 +微量 FSH 和 TCM一199、丙酮酸钠、碳酸氢钠和碳酸钠等由