AFLP分子标记技术发展.pdfVIP

《生命的化学》2003 年 23 卷 1 期 ·65 · ●技术与方法 CHEMISTR Y OF L IFE 2003 , 23( 1) ( ) 　　文章编号 2003 AFLP 分 子 标 记 技 术 的 发 展 郑先云 　郭亚平 　马恩波 ( 山西大学生命科学与技术学院, 太原 030006) 摘要 : AFL P 分子标记技术是一种建立在 PCR 技术和 RFL P 标记基础上的新的 DNA 指纹分析技术 ,具有多态性丰 富、结果稳定可靠、重复性好、所需 DNA 量少 ,且可以在不知道基因组序列的情况下进行研究等特点 ,现已被广泛用 于构建遗传图谱、遗传多样性研究、系统进化及分类学、遗传育种和品质鉴定以及基因定位等方面。介绍 AFL P 技术 的原理以及AFL P 技术基础上条件的改进。 关键词 :分子遗传标记 ; AFL P ; 条件优化 中图分类号:Q7 ( ) ( 　　扩增片段长度多态性 amplified fragment length ter ,另一种为高频剪切酶 识别位点为四碱基的 polymorphism , AFL P) 是一种基于 PCR 和 RFL P 基 frequent cutter) 。利用双酶切可产生更好的扩增反 础上发明的 DNA 指纹技术。该技术与 RFL P 的主 应 ,在凝胶上产生适宜大小的适于分离的片段 ,不同 要区别是用 PCR 代替 Southern 杂交 ,它兼有 RFL P 的内切酶组合及选择性碱基的数目和种类可灵活调 技术的可靠性和 PCR 技术的高效性 ,且具有快速、 整片段的数目 ,从而产生不同的 AFL P 指纹。Eco RI 灵敏、稳定、所需 DNA 量少、多态性检出率高、重复 为六碱基识别位点的低频剪切酶 , 其他限制性酶如 性好、可以在不知道基因组序列特点的情况下进行 Hin dIII 、Pst I 、S ac I 、A pa I 在 AFL P 中和 Eco RI 作 研究等特点 ,所以被认为是一种十分理想的、有效 用相同 ,但 EcoRI 更为常用。Mse I 为四碱基识别 的、先进的分子标记 , 现已被广泛用于遗传图谱构 位点的高频剪切酶 , Mse I 常用于富含A T 的真核生 建、遗传多样性研究、基因定位及品质鉴定等方面。 物基因组 DNA 链的切割 ; 同为四碱基识别位点的 1. AFLP 技术的原理 Taq I 酶会产生扩增片段的不等分布 ,常出现在凝胶 AFL P 技术是建立在基因组限制性片段基础上 的上部; Mse I 会产生更小的限制性片段 ,在 AFL P 的 PCR 扩增。由于不同物种的基因组 DNA 大小不 指纹分析中更为常用。AFL P 分析中常用的酶组合 同 ,基因组 DNA 经限制性内切酶酶切后 ,产生分子 为 Eco RI/ Mse I 。 量大小不同的限制性片段。使用特定的双链接头与 　　AFL P 引物包括三部分:5′端的与人工接头序