转BADH基因苜蓿T1代遗传稳定性和抗盐性研究.pdfVIP

第 18卷 第 6期 草 业 学 报 65— 7l V01．18。No．6 ACTA PRATACULTURAE SINICA 2009年 12月 转BADH基 因苜蓿 T1代遗传 稳定性和抗盐性研究 燕丽萍 ，夏阳 ，梁慧敏 ，王珍珍 ，李双云 ，刘翠兰 ，庞彩红 (1．山东省林业科学研 究院 ，山东 济南 250014；2．江苏农林 职业技术学 院，江苏 句容 212400) 摘要 ：采用分子生物学检测和不同浓度 的NaC1对转 BADH基因苜蓿 T1代 2个株系进行遗传稳定性和抗盐性研 究。结果表 明，2个株系的T1代 PCR阳性植株和 阴性植株分离 比例都符合孟德尔遗传规律 ；在 0．8 NaC1胁迫 下，转基因植株 Northern杂交表达量明显增加 ，BADH酶活性和甜菜碱含量分别 比对照植株增加 2～4和 4～5倍 ； 不 同浓度 NaC1胁迫下转基因株系脯氨酸和可溶性糖含量、抗氧化酶活性都显著高于对照植株 ，而 电导率和丙二醛 含量显著低于对照植株 。表 明转入 的BADH基因可以稳定遗传 ，转基 因苜蓿植株耐盐性明显高于对照 。 关键词 ：苜蓿 ；BADH基因；盐胁迫 中图分类号 ：Q945．7；S551 ．703．4 文献标识码 ：A 文章编号 ：1004—5759(2009)06—0065—07 盐碱地是人类面临的世界性问题，全球约有 i00多个 国家存在不 同类型盐碱地 ，占陆地面积 的 10 左右。 我国是盐碱地面积较大的国家之一 ，有各类盐碱地约 3460万 hm。，其 中盐渍化耕地 600万 hm D,23。苜蓿 (Medicagosativa)素有 “牧草之王”的美称 ，是世界上最重要的豆科牧草之一 ，因其高营养价值和高产等特性 明 显优于其他草类Ⅲ ，在世界上栽培面积最广、应用最广泛 ，它不但具有抗旱 、抗寒 、高产 、优质、营养丰富等特点 ，还 具有改良土壤结构、理化性质、保持水土和保护环境等作用 。但现有的苜蓿品种无论国内培育还是 国外引进 的， 抗旱、耐盐能力仍然有限，限制了在干旱和盐碱土壤的种植 ，因此 ，对苜蓿抗盐性的研究与改 良非常重要 。提高苜 蓿抗盐能力的方法主要是培育抗盐品种 ，而基因工程技术是快速实现这一 目的有力工具 。 甜菜碱 (betaine)是一类季铵化合物 ，能够调节胞 内渗透压 ，保护胞内酶活性 ，稳定细胞膜结构等 ，被认为是 许多植物细胞代谢相容的最好渗透保护物质之一 ，在高等植物中，甜菜碱的合成是经过胆碱一甜菜碱醛一甜菜碱 两步不可逆的氧化反应催化完成的，甜菜碱醛脱氢酶 (BADH)是合成甜菜碱的关键酶 ，在干旱和盐胁迫下该酶活 力显著提高 ，从而大大增加甜菜碱的积累_3“]。2005年梁慧敏等 利用农杆菌(Agrobacteriumtumefaciens)介 导法将 BADH 基因导人紫花苜蓿中苜 1号 中，经转基 因植株的分子生物学检测说明外源基 因已嵌入苜蓿染色 体并得到表达 。本试验以受体亲本 中苜 1号为对照 ，对转 BADH 基 因苜蓿 自交株系子一代 (T1)试管苗进行 了 遗传稳定性和抗盐性研究 ，旨在探讨转 BADH 基因苜蓿耐盐性的生理基础 ，为耐盐株系的筛选提供理论依据。 1 材料与方法 1．1 材料 转 BADH 基因紫花苜蓿 T1代 自交株系 T1—8、T1—12及其受体亲本 “中苜 1号”(对照植株)无菌试管苗均 由 山东省林业科学研究院省重点改 良实验室保存，每 25d在 MS盐分+B 有机培养基上继代繁殖 1次 。 1．2 方 法 1．2．1 植物基因组 DNA提取和 PCR扩增 植物基因组 DNA 的提取 (CTAB法)和PCR检测参照王关林和方 宏筠 的方法。山菠菜 (Atriplexhortensis)BADH 基 因 PCR扩增所用引物 ：P1：5，_AGAATGGCGTTCCCA— ATTCCTGCTC一3和 P2：5-TTCAAGGAGACTTGTAccATCCCCA一3；PCR反应总体积 25 L，10×反应缓 冲液2．5 L，脱氧核苷酸混合物 (dNTP)2 L，P1(5mol／L)2 L，P2(5p．mol／L)2 L，模板 DNA2 L，Taq