05-大肠杆菌表达系统地研究进展.pdfVIP

药 　物 　生 　物 　技 　术 416 Phar maceutical Biot echnolo gy 　2005 ,12 (6) :4 16～420 大肠杆菌表达系统的研究进展 1 2 1 ,2 戎晶晶 ,刁振宇 ,周国华 ( 1. 中国药科大学生命科学与技术学院 ,江苏 南京 2 10009 ;2 . 华东医学生物技术研究所 ,江苏 南京 2 10002) 摘 　要 　近年来利用基因调控 、融合表达 、共表达以及代谢工程 、定向进化等策略对大肠杆菌系统的载体和 宿主进行了合理的改进 ,使 目的基因的表达水平以及产物蛋白的活性大大提高 ,尤其是对长期以来有关真核基 因在原核细胞中表达所存在的糖基化 、二硫键形成等翻译后加工问题的研究取得了突破 ,使得大肠杆菌表达系 统在研究和生产中的应用范围得到进一步拓宽 。文章从表达载体和宿主细胞两个方面对大肠杆菌表达系统的 研究进展进行了综述 。 关键词 　大肠杆菌表达系统 ;表达载体 ;宿主细胞 ;重组蛋白 中图分类号 :Q93 　　　文献标识码 :A 　　　文章编号 :100589 15 (2005) 0604 1605 　　自上世纪 70 年代以来 ,大肠杆菌一直是基因工程中应 烈 ;另外 ,还发现外源基因的表达使宿主核糖体合成速率 、 用最为广泛的表达系统 。尽管基因工程表达系统已经从 翻译延长因子和折叠酶表达水平 、细胞生长率下降 ,而使 大肠杆菌扩大到酵母 、昆虫 、植物及哺乳动物细胞 ,并且近 细胞呼吸活力上升[2 ] 。目前应用的表达载体主要 问题是 年来出现了很多新型的真核表达系统 ,但是大肠杆菌仍然 表达过程中出现的全或无的情况 ,通常表达的培养物都是 是基因表达的重要工具 。尤其是进入后基因组时代以来 , 非纯种的细胞群 ,其 中有一些细胞可 以最大限度地被诱 有关蛋白结构以及功能研究的开展 ,对基因表达的要求更 导 ,而另一些细胞在诱导后基因的表达被关闭。分离具有 高 ,这时大肠杆菌往往是表达的第一选择 。文章综述了近 合适强度启动子及翻译速率的载体变种可以优化表达水 年来有关大肠杆菌表达载体及宿主细胞的改造工作 。 平 ,说明启动子 的选择对于基 因的诱导表达非常重要 。 Deborahat 提出在芯片上排列具有不同强度级别启动子的 1 　表达载体 载体进行互补分析 , 可能有助于筛选最为适合 的启动 1. 1 　表达调控 子[3 ] 。开发非 IP T G 或阿拉伯糖诱导的载体也可以提高基 构建有效的表达载体是表达 目的基因的基本要求 , 同 因表达水平 ,Qing 等利用 csp A 基因的独特性开发了一系 ( ) 时也是影响基因表达水平 以及蛋 白活性的重要因素 。标 列冷休克表达载体 p Cold ,使 目的基因在低温下 15 ℃ 准的大肠杆菌表达载体的主要组成 :启动子 、操纵子 、核糖 诱导表达 ,提高了产物的溶解性和稳定性[4 ] 。 体结合位点、翻译起始区