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有关概念解读 原代培养：从机体取出后立即培养的细胞为原代细胞。培养的第1代细胞与传10代以内的细胞称为原代细胞培养。 传代培养：将原代细胞从培养瓶中取出，配制成细胞悬浮液，分装到两个或两个以上的培养瓶中继续培养，称为传代培养。 3、体细胞核移植技术存在的问题 胚胎移植－动物幼体产出 概率＜10％ 克隆动物存在着健康问题 克隆动物的食品安全性问题存在争议 * 动物细胞工程 动物细胞培养 动物细胞融合 单克隆抗体技术 核移植技术 动物细胞工程常用技术 一、动物细胞培养 动物胚胎或幼龄动物的组织、器官 细胞悬浮液 胰蛋白酶 10代细胞 原代培养 50代细胞 传代培养 细胞株 无限传代 细胞系 遗传物质改变 遗传物质未改变 1、过程 (取材) 细胞株：原代细胞一般传至10代左右细胞生长 停滞，大部分细胞衰老死亡，少数细胞存活到40~50代，这种传代细胞为细胞株。 细胞系：细胞株传代至50代后又出现细胞生长停滞状态，只有部分细胞由于遗传物质的改变，具有癌细胞的特点，使其在培养条件下可以无限制传代，这种传代细胞为细胞系。 2、动物细胞培养的条件 无菌、无毒的环境 培养液和所有培养用具进行无菌处理 措施：培养液中加抗生素，定期更换培养液 营养 糖、氨基酸、无机盐、微量元素、 促生长因子（维生素、激素等）和动物血清 温度和PH 36.5±0.5℃ 7.2-7.4 气体环境 O2 CO2 95％空气 5％的CO2 3. 动物细胞培养的应用 （２）解决为大面积烧伤病人移植皮肤问题。 　　（利用贴壁生长和接触抑制原理） （３）检测有关物质毒性。 （４）培养正常或病变细胞，用于科研。 （1）获得细胞产物，如蛋白质生物制品 ： 病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体等。 植物组织培养和动物细胞培养的比较 培养结果 培养目的 培养基特有成分 培养基性质 原理 动物细胞培养 植物组织培养 比较项目 植物体 细胞株、细胞系 快速繁殖、培育无病毒植株等 获得细胞或细胞产物 蔗糖、植物激素 葡萄糖、动物血清 固体培养基 液体培养基 细胞的全能性 细胞增殖 二、核移植技术 克隆多利羊培育过程 黑面绵羊去核卵母细胞 白面绵羊乳腺细胞核 细胞核移植 重组细胞 电脉冲刺激 早期胚胎 胚胎移植 另一头绵羊的子宫 妊娠、出生 克隆羊多利 1、过程 克隆动物的概念： 用核移植的方法得到的动物称为克隆动物 2、体细胞核移植技术的应用前景 畜牧业、医药卫生以及其他领域有着 广泛应用前景 1、加速家畜遗传改良进程，促进优良畜 群繁育 2、保护濒危物种，增加动物的存活数量 3、可作为生物反应器，生产医用蛋白、 克隆动物细胞、组织、器官可作为移植的供体了解胚胎发育及衰老过程、做疾病模型等 4、器官移植的供体 一、动物细胞融合（细胞杂交） 概念：两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程 细胞A 细胞B 杂种细胞 灭活的病毒 物理法 化学法 仙台病毒 疱疹病毒 新城鸡瘟病毒 用灭活的病毒诱导动物细胞融合示意图 细胞核 病毒颗粒 细胞核 阅读思考 长期以来，为了获得抗体，采用的方法是把某种抗原反复注射到动物体内，然后从动物血清中分离出所需抗体。用这种方法获得的抗体，不仅产量低，而且抗体的特异性差，纯度低，反应不够灵敏。人们发现，在动物发生免疫反应的过程中，体内的淋巴细胞可以产生多达百万种以上的特异性抗体，但是每个淋巴细胞只分泌一种化学性质单一、特异性强的抗体。要想获得大量的单一抗体，必须用单个淋巴细胞进行无性繁殖，即克隆 怎样才能获得单克隆抗体？ 仅用细胞培养技术可行吗？ 哪种细胞是可以无限增殖的？ 有什么方法能使淋巴细胞产生抗体的同时，也能 无限增殖？ 二、 单克隆抗体的制备 抗原 B淋巴细胞 骨髓瘤细胞 细胞融合、筛选 杂交细胞 细胞培养 筛选，继续培养 足够数量的、能产生特定抗体的细胞群 单克隆抗体 1、过程 体内培养 体外培养 同核体 同核体 异核体（杂交细胞） 人工诱导 还有3个3个以上细胞的融合------- 第一次筛选得到杂交瘤细胞 （3）整个制备过程为何要经过两次筛选? 第二次再筛选出能产生特异性抗体的细胞群 由于该细胞群是单个杂交瘤细胞克隆得来的，所以产生的抗体必然是化学性质单一的，特异性强的单克隆抗体。这里的单克隆确有单个细胞克隆的含义，只不过克隆的不是效应B细胞，而是杂交瘤细胞。 *