PCR安装准备-黄曲霉素.docVIP

天津埃文森科技有限公司 编号：2010/11/18 To： Fax： From：张志霞 Fax：022 尊敬的客户，您好！ 感谢您购买美国科学系统公司（SSI）的柱后衍生系统。收到货物后，请您按照当地商检部门的规定验货，并做好以下安装准备工作（请在已准备好的项目后划V） SSI-PCR验收标准－黄曲霉素对照品 一．黄曲霉素对照品测试需准备条件： 水 高纯水 □ 甲醇 色谱纯 □ 乙腈 色谱纯 □ 碘 分析纯 □ 黄曲霉毒素标准品（黄曲霉毒素B1、B2、G.1、G2)：纯度≥99%._______________________________________ 安装地址：_______________________________________ 邮编：___________________________________________ 电话：___________________________________________ 传真：___________________________________________ 高效液相系统（HPLC）品牌 型号： (请按照仪器商标填写) 到货日期：_______________________________________ *希望安装日期： *我公司的工程师会在此日期前于您联系，调整并确认最终安装日期。 因此在您做好以上准备工作后，请尽快将这两页一起传真至022 后附: 2010版中国药典测定药材及制剂中的黄曲霉毒素 2010版中国药典测定药材及制剂中的黄曲霉毒素 （以黄曲霉毒素B1,B2,G1,G2总量计） 对照品的制备 混标(B1/G1 1000ppb, B2/G2 300ppb), 取0.5ml, 置于10ml容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，为储备液。 取1ml储备液置于25ml容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，为工作液。 备注：黄曲霉毒素对照品的配制和保存需要避光冷藏，用棕色瓶子为佳，否则容易分解。如果检测峰形不佳，建议用70%的甲醇溶液配制储备液，降低溶剂强度以改善峰形。工作溶液应尽量现用现配，当天使用。 样品制备： 称取15g的样品粉末（过二号筛），加3g 氯化钠，置于均质瓶中，加75ml的70%甲醇溶液。 高速搅拌2min (搅拌速度大于11000转/分钟) 离心5min (离心速度2500转/分钟) 取上清液15ml 置于50ml容量瓶中，用纯水稀释至刻度。 用微孔滤膜（0.45um）滤过。 使用免疫亲和柱分离黄曲霉毒素： 将免疫亲和柱(AflaTest P)置于固相萃取装置上。 将样品制备中得到的50ml 上清定容液中量取20ml, 以3ml/min的速度流过亲和柱，流出液弃去。 20ml纯水分两次清洗亲和柱，最后使空气进入亲和柱，将水全部挤出柱子。 在亲和柱底部置2ml容量瓶，加适量甲醇以2ml/min的速度流过亲和柱并收集，用甲醇定容至刻度。 液相柱后衍生定量分析： 分析条件：C18柱，甲醇-乙腈-水=40:18:42， 流速0.8ml/min 柱后碘衍生溶液：0.05%的碘溶液（取碘0.5g, 加入甲醇100ml 溶解，用水稀释至1000ml制成）, 衍生泵流速0.3ml/min, 衍生化温度70oC。 荧光检测器， Ex=360nm(或365nm), Em= 450nm 两个相邻峰的分离度应大于1.5。 分析图谱 黄曲霉毒素B1，B2，G1，G2，M1，和M2 由上图可看出， 不用碘柱后衍生方法时，G1和B1的峰很小甚至消失。 系统关机： 设定HPLC 泵流量为甲醇1ml/min 按Pump 键关掉衍生剂泵 设定反应器温度为40oC 将衍生剂泵溶液换为水，用注射器从Prime/Purge 阀抽取10ml 将衍生剂泵溶液换为甲醇：水=1:1 开启衍生剂泵至反应器温度达到40oC或至少30mi