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蛋白质的生物合成 遗传密码 蛋白质生物合成的概述 翻译 定义：生物体的核糖体以mRNA为模板，利用氨基酸从头合成蛋白质的过程 合成场所：真核：内质网，原核：拟核区 翻译时读取mRNA上信号的顺序是5’?3’ 蛋白质合成的方向是N ?C 核糖体的结构 原核核糖体 直径18nm，含60-65%rRNA，30-35%的蛋白质。 大亚基：50S，含23 S、5 S rRNA，34 种核糖体蛋白 小亚基：30S，含16 S rRNA，21 种核糖体蛋白 真核核糖体 直径22nm，55%rRNA，45%的蛋白质 大亚基：60S，含28 S、5.8S，5S rRNA，约50 种核糖体蛋白 小亚基：40S，含18 S rRNA，约33 种核糖体蛋白 核糖体的功能位点 mRNA结合位点 氨酰tRNA结合位点：A位点 肽酰tRNA结合位点：P位点 tRNA释放位点: E位点 移位酶的作用位点（延伸因子G结合位点） 肽酰转移酶催化位点 遗传密码 遗传密码的得出 三联体密码的可能性 1961，Nirenberg等发现polyU ? Phe 非重复密码子的获得 密码子的几个重要特点 通用性：所有生物基本上共用一套密码子 例外：线粒体：UGA，终止子 ? Trp；AUA，Ile ? Met，CUA, Leu ? Thr 单向连续性：不间断、不重叠 简并性：一个氨基酸可以有若干个密码子 摆动性：密码子第三位专一性较低 UAG、UAA、UGA三个终止子 AUG既编码Met，同时也是起始子 密码的阅读框 一些生物的基因可以有不同的转录、翻译起点，形成不同的阅读框 密码子的生物学意义 中心法则的重要一环 研究生物进化的重要证据 基因工程的重要前提 第二套密码子存在的可能 tRNA的某些序列可能决定其与氨基酸选择性的结合 已经发现的几个tRNA密码 Ala：G3 ? U70 、Arg：A20 、Gln：U35 、Ile：G5 ? G69 （P277） 人工微小tRNA对认识tRNA功能的贡献 第二套密码子对基因工程的意义 不同生物的密码子“偏好” 利用第二套密码子推测和校正偏好的可能 蛋白质生物合成的一般过程 蛋白质生物合成的一般过程（原核） 氨基酸的激活 氨基酸在氨酰-tRNA合成酶的作用下，生成氨酰-tRNA的过程称为氨基酸的激活 氨酰-tRNA合成酶的专一性 对氨基酸一般有高度专一性 只作用于L-氨基酸 有些对氨基酸专一性不高的酶，对tRNA有极高的专一性 起始复合体的组装 翻译并不是从mRNA的5’-端第一个核苷酸开始，而是在大约25个核苷酸以后 SD序列：原核生物mRNA的起始密码子上游10个核苷酸的位置，有一段富含嘌呤的序列，与16S rRNA3’-端的核苷酸序列互补，称Shine-Dalgarno序列 起始因子：与蛋白质合成起始相关的蛋白因子：IF1、IF2、IF3 甲酰甲硫氨酸的合成 甲硫氨酸与tRNA结合生成Met- tRNA Met- tRNA接受来自于N10-甲酰四氢叶酸的甲酰基生成fMet- tRNA 保护N-端, 避免错误连接 组装过程 IF3与核糖体的30S小亚基结合，阻止小亚基与大亚基结合 mRNA与30S小亚基、IF3结合生成复合体 甲酰甲硫氨酸-tRNA与IF1、IF2组成含有结合态GTP的复合体 fMet- tRNA- IF1、IF2的复合体与mRNA- 30S小亚基- IF3 的复合体相互作用， IF3 释放 50S大亚基与前述复合体结合， IF2催化GTP水解成GDP和磷酸 IF1、IF2释放 fMet- tRNA处于核糖体的P位点 肽链的延伸 延长因子：EFTu，EFTs的活化 EFTu，EFTs的激活循环 氨酰-tRNA与EFTu的结合 肽链延伸的过程 氨酰-tRNA进入A位点：氨酰-tRNA与延长因子Tu结合形成Tu-GTP-aa-tRNA复合物，进入A位点 肽键形成：P位点肽酰-tRNA的肽酰基在肽酰转移酶的作用下转移到A位点，与氨酰-tRNA的氨基作用形成肽键，第一个肽键是fMet的羧基与下一个氨基酸的氨基缩合形成的 移位：在延伸因子EFG的作用下，核糖体与mRNA发生5’?3’的相对移动。消耗 1 分子GTP ，每次移动一个密码子的距离 移位后，原处于A位点的肽酰-tRNA移动到P位点， P位点的空白tRNA移动到E位点 E位点的tRNA释放 肽链合成的终止 终止子的识别 没有tRNA识别终止密码子 终止因子：RF1 、RF2 、 RF3 肽链合成的终止过程 没有氨酰-tRNA进入核糖体，肽链的延伸暂停 RF1 、RF2识别终止密码子，并与之结合阻止核糖体的位移 肽酰转移酶转移酶活性转变为水解酶活性，肽链释放 核糖体解散，30S亚基与IF3 结合避免与50S亚基重新结合 释放后蛋白质进一步加工 多聚核