灭蚊真菌贵阳腐霉基因组文库的构建.pdfVIP

维普资讯 第33卷 第3期 2008年6月 贵 阳 医 学 院 学 报 Vo1．33 No．3 JoURNALOFGUIYANG MEDICAL COLLEGE 2oo8．6 灭蚊真菌贵阳腐霉基因组文库的构建木 洪 焱 ，苏晓庆” (贵阳医学院生物学教研室，贵州 贵阳 550004) [摘 要]目的：建立贵阳腐霉(PythiumguiyangenseSu)基因组文库以便克隆该真菌的基因特别是与灭蚊毒 力有关的基因。方法：用限制性内切酶 AI消化贵阳腐霉基因组 DNA，同时用限制性内切酶BamHI消化质 粒pBluescriptSK(一)，再将其去磷酸化；将基因组的酶切产物连接到载体上，再转化大肠杆菌DH5cx。结果：所 建贵阳腐霉的基因组文库共包含 11520个克隆。经蓝白斑筛选、PCR验证以及双酶切验证 ，文库平均插入片段 长度为 1．2kb，覆盖率约为贵阳腐霉基因组的3倍。结论 ：建立了贵阳腐霉的基因组文库，可以从中克隆与贵阳 腐霉灭蚊毒力有关的基因。 [关键词]真菌：灭蚊；DNA限制酶类；贵阳腐霉；基因组文库 [中图分类号]Q949．323．3：Q936 [文献标识码]A [文章编号]1000．2707(2008)03-0248-03 Construction ofaGenomicLibraryofPythium guiyangenseSu，A mosquito-~lnngFungus HONG Yan，SU Xiaoqing (DepartmentofBiology，GuiyangMedicalCol~ge，Guiyang550004，Guizhou，China) [Abstract]Objective：ToconstructagenomiclibraryofPythiumguiyangenseSu，strain1938GY． Methods：ThedigestedgenomicDNAwithSau3A1wasinsertedintopBluescriptSK(一)plasmid whichwasdigestedwiht BamHIandtreatedwiht calfintestinalalkalinephosphatase．Next．htere· eombinantplasmidsweretransferred intoE．coliDH5a．Re训 ts：A genomieDNA librarywascon— structedwhichincluded11520cloneswiht averageinsert sizesabout1．2kb．Conlusions：Th eresults ofhtisexperimentprovideasourceforscreeninggenesofP．guiyangense，andlaybasisofrfurtherwork ofgeneticengineeringofthisfungus． [Keywords]fungi；mosquitocontrol；DNArestrictionenzymes；PythiumguiyangenseSu；genomie DNA library 贵阳腐霉(PythiumguiyangenseSu)是苏晓庆 其他与灭蚊毒力有关的基因，以便用于贵阳腐霉的 教授于 1994年在贵阳医学院土壤中分离得到的一 基因工程改 良，因此，构建了贵阳腐霉的基因组文 株新的灭蚊真菌，属卵菌纲、霜霉 目、腐霉科、腐霉 库。现报道如下。 属。实验证明，几丁质酶在真菌侵染昆虫的过程中 发挥着十分重要的作用 ¨ 。2003—2005年，对几 1 材料与方法 丁质类似物