错配修复基因mutS的高效表达与表达产物活性鉴定.pdfVIP

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2017-08-07 发布于安徽
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错配修复基因mutS的高效表达与表达产物活性鉴定.pdf

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18 卷 5 期生　物　工　程　学　报 Vol. 18 　No. 5 2002 年 9 月 Chinese Journal of Biotechnology September 　2002 DNA 错配修复基因 mutS 的高效表达及表达产物活性鉴定　 1 ,2 1 1 1 3 2 3 毕利军　周亚凤　邓教宇　张先恩　张成刚　Anthony E. G. Cass 1 ( 中国科学院武汉病毒所,武汉　430071) 2 ( 中国科学院沈阳应用生态研究所,沈阳　110015) 3 ( ) Biochemistry Department , Imperial College of Science , Tehchnology Medicine , London ,SW72AY,UK ( ) ( ) 摘　要　将 DNA 错配修复基因 mutS 2156kb 克隆于分泌型原核表达载体pET32a + 上 , 以N 端融合 6 个组氨酸的 ( ) 形式在 E . coli AD494 DE3 中进行了 IPTG 诱导表达。SDS2PAGE 分析证实有一与预期分子量相应的诱导表达条 ( 2 + ) 带 ,其表达量占全菌蛋白质的 35 %左右 ,且表达蛋白以可溶形式存在。利用固定化金属离子 Ni 配体亲和层析柱纯化目的蛋白 ,其纯度为 90 %以上。与含有错配碱基DNA 双链的结合反应证明该蛋白具有特异性识别、结合含有错配碱基 DNA 双链的生物活性。关键词　错配修复基因 mutS , 表达 , 纯化 , 鉴定 ( ) 中图分类号　Q789 　　文献标识码　A 　　文章编号 100023061 2002 0520536205 ( ) 　　DNA 错配修复 Mismatch repair , MMR 是细胞复学博士馈赠。制后的一种修复机制 ,具有维持 DNA 复制保真度 , 11112 　生化试剂 :DNA 聚合酶、限制酶及 T4 DNA 控制基因变异的作用。该系统首先是在原核生物大连接酶为 Takara 和 Sangon 公司产品。氨苄青霉素、 [1～4 ] [5～7 ] ( ) ( 肠杆菌中发现的 , 随后在真核生物及