β-榄香烯联合DC%2fDRibble疫苗治疗小鼠肝癌免疫机制及研究.pdfVIP

ß-榄香烯联合DC/DRibble 疫苗治疗小鼠肝癌免疫机制研究 1 1,2 2 3 2 倪菲菲 ，沈洪 ，刘亚军 ，林琳 ，刘增巍 ( 1.南京中医药大学第一临床医学院，南京210029; 2.江苏省中医院消化科,南京210029; 3.江苏省中西医结合医院，南京210000) 【摘要】背景与目的：β-榄香烯是从姜科植物莪术中提取的抗癌有效成分， 树突状细胞 (Dendritic cells,DC)是目前发现的功能最强大的肿瘤抗原专职免疫递 呈细胞, 自噬小体 (Drips in blebs ，简称DRibble)，是肿瘤细胞 “递交”肿瘤抗原 的有效载体之一，通过观察 β-榄香烯联合DC/DRibble 疫苗对小鼠肝癌的治疗作 用，以探讨 β-榄香烯抗肿瘤的免疫机制。方法：制备Balb/c 小鼠脾脏来源的DC 并鉴定其表型，以Balb/c 小鼠来源的肝癌细胞株BNL1MEA.7R.1(简称BNL)为靶细 胞，摹集富含肿瘤 “信息”的抗原载体—自噬小体，制备 DC/DRibble 疫苗。分 别体外观察 β-榄香烯联合 DC/DRibble 疫苗对小鼠脾细胞 IFN- γ分泌水平的影 响，体内观察 β-榄香烯 联合 DC/DRibble 疫苗对小鼠肝癌的抑制作用。结果： β-榄香烯联合 DC/DRibble 疫苗能诱导脾细胞产生高水平的 IFN- γ，同时能在体 内诱导较强的免疫应答并有效抑制小鼠皮下肝癌肿瘤的生长。结论：β-榄香烯 联合 DC/DRibble 疫苗能够诱导特异性免疫细胞分泌细胞因子功能增强，从而发 挥抗肿瘤作用，其免疫效应基础可能与增强DC 抗原递呈功能有关。 【关键词】β-榄香烯; 肝癌；树突状细胞；自噬小体 肝癌是恶性程度极高，预后极差的恶性肿瘤之一，严重威胁人类的健康，在 肿瘤发生发展过程中，肿瘤抗原不能有效呈递给T 细胞是导致免疫逃脱的重要原 因。树突状细胞 （dentritic,DC ）是目前研究发现的体内最强的抗原递呈细胞 （antigen-presenting ，APC ）。自噬小体 (Drips in blebs ，简称DRibble)，是肿瘤 细胞 “递交”肿瘤抗原的有效载体之一，APC 交叉递呈源自自噬小体抗原，并诱 [1] 导细胞免疫应答的效果明显强于灭活肿瘤细胞和可溶性蛋白 。β-榄香烯是从姜 科植物莪术中提取的抗癌有效成分，其有效生物活性能降低肿瘤细胞的有丝分 裂，诱发肿瘤细胞凋亡，抑制肿瘤生长，还能作用细胞膜，使肿瘤细胞破裂，改 [2] 变和增强肿瘤细胞的免疫原性，诱发和促进抗体对肿瘤细胞的免疫反应 。前期 实验已经证明 β-榄香烯可以增强 DC 表面多种免疫相关的共刺激因子的表达， 更有利于DC 呈递外源性抗原以及激活T 细胞，使机体更好的发挥免疫监视和免 [3] 疫应答 。本研究主要探讨 β-榄香烯联合 DC/DRibble 疫苗治疗小鼠肝癌的免疫 机制。 1 材料和方法 1.1 动物与试剂 小鼠 BNL 肝癌细胞株由东南大学免疫实验室冻存； Balb/c 雌性小鼠， 6-8 周龄，购自扬州大学实验动物中心，清洁级培养；β- 榄香烯购自大连华立金港 药业有限公司，批号为0904281 ；Flt3-L 和GM-CSF 真核表达质粒由东南大学免疫 实验室常规冻存；RPMI-1640 培养基购自 Invitrogen 公司；胎牛血清购自杭州四 季青生物制品研究所；红细胞裂解液购自碧云天生物试剂公司；流式检测用荧光 标记抗体 CD11c-PE，CD11b-FITC 购自美国 BD 公司；小鼠细胞因子 IFN- γELISA 检测试剂盒购自美国RD 公司；蛋白定量试剂盒购自江苏凯基生物有限公司。 1.2 树突状细胞的制备 Balb/c 小鼠脾脏来源的DC 制备按文献4 的方法，采用尾静脉快速注射Flt3-L、 GM-CSF 质粒法