非水反相高效液相色谱法同时检测人血清中V_A、V_D_3、V_E与β-胡萝卜素.pdfVIP

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2017-08-07 发布于安徽
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非水反相高效液相色谱法同时检测人血清中V_A、V_D_3、V_E与β-胡萝卜素.pdf

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非水反相高效液相色谱法同时检测人血清中 VAVD3VE和-胡萝卜素张翠丽王珍李东光大（连医科大学流行病学教研室大连 116023）邹汉法洪名放张玉奎* 中（国科学院大连化学物理研究所国家色谱研究分析中心大连 116011）提要介绍一种用非水反相高效液相色谱法及外标法同时检测人血清中的视黄醇VA、胆钙化醇VD3、ⅵ-生育酚 VE）和-胡萝卜素含量的方法。此方法实际用于检测胃癌病例及对照血清标本188份，有操作简便、检出限低的特点。关键词非水反相高效液相色谱法，维生素A，维生素D3，维生素E，-胡萝卜素，人血清正己烷、二氯甲烷均为国产分（析纯）。 1 前言 3 实验方法维生素是人体所必需的营养素，与人体的健康有着密切的联系。近年来流行病学调查及实验研究 3.1标准溶液的配制发现，某些癌症的危险度与体内维生素如视黄醇 3.1.1储备液精确称取标准品VAVD3VE及 V（A、胆钙化醇VD3、-生育酚VE）及-胡萝卜 β胡萝卜素，以无水乙醇分别溶解，浓度（g/mL 索含量有关。因此检测人血清中这几种维生素的水依次为40，?4.860064，储于 24℃冰箱备用。平，对于某些疾病的病因探索和防治有实际意义。反 3.1.2 工作液测定时以无水乙醇稀释储备液，配相高效液相色谱法 R（P-HPLC）正是一种快速、准确成5种不同含量的混合工作液。其中VAVD3VE和检测血清中脂溶性维生素含量的方法。国外自八十 β胡萝卜素的浓度 n（g/mL）依次为：4029.6，年代始已广泛应用，国内近来报道也日见增多。 40032②6074100080③80148120096；④ 我们对Miller等[]用RP-HPLC同时检测血清 1002961600128⑤1605922000160 浓（度梯中脂溶性维生素和-胡萝卜素的方法作了改进，主度不匀是因浓度不同的储备液同时稀释所致）。要是采用毒性较低的二氯甲烷取代毒性较大的乙腈 3.1.3 检测分别取5种混合工作液各100L进和氯仿做流动相，一次进样同时检测人血清中VA、样，测得VA、VD3、VE和-胡萝卜素的保留时间 VD3、VE及-胡萝卜素，其中同时检测VD3为本法新 m（in）为：3.477.338.4021.78见（图1 测量峰高，以标样校正，计算含量。创。 3.2 血清样品处理 2 仪器与试剂振荡取0.血5m清in0后.2，m加L入，加0无.4m水L乙正醇己0烷.2，m旋L振，立lm即in旋，混以仪器 SP8800高压泵美（国光谱物理公司）， 3000r/m离心 0min，取己烷层0.3mL，以缓氮气流 JA-SCO100- 紫外分光检测器，7125进样阀，吹干以上操作均在暗室中进行。残渣用 .15mL无 SpherisorbCl84.6mmi.d. 250mm 10 ）056记录仪。水乙醇充分溶解后进样。分离谱图见图2。 3.3色谱条件试剂 VAretinol,Fluka VD3cholecalcifer-