虫生真菌分子生物学的研究进展.pdfVIP

·88 · 微 生 物 学 通 报 　　　　　　　　　　　　2001 年 28 (3) 虫生真菌分子生物学研究进展 王成树 　李增智 ( 安徽农业大学经济昆虫菌物研究所　合肥 　230036) 摘要 : 虫生真菌分子生物学的研究自开展以来 , 有 20 多种与杀虫毒力相关的蛋白酶得到纯化 , 而与 之相对应的基因也分别得到克隆、测序 。陆续的基因克隆表明, 虫生具菌中的重要毒力基因以基因族 的形式存在 , 在精确的表达调控下以适应不同的寄主种类和不同的环境条件 。基因工程研究表明, 以 增加毒力基因拷贝的方式可显著提高虫生真菌的杀虫速率 , 带有外源基因标记的菌株也是环境释放示 综研究的良好材料及方法 。 关键词 : 虫生真菌 , 蛋白酶 , 基因克隆, 表达调控 , 基因工程 中图分类号 : Q93 　　文献标识码 : A 　　文章编号 : (2001) 近年来 , 由于虫生真菌在害虫持续控制及维护物种多样性方面的特殊优势 , 其应 用及基础研究发展迅速 。商品化方面曾经有 40 余种产品登记注册[ 1] , 其中研究及应用 比较成熟的主要为球孢白僵菌 ( Beauveria bassiana) 、金龟子绿僵菌 ( Metarhizium aniso pliae) 、蜡蚧轮枝孢 ( Verticillium lecanii ) 、玫烟色拟青霉 ( Paecilomyces fumosoroseus ) 及汤普生被毛孢 ( Hirsutella thompsonii ) 等 。随着分子生物学技术及水平的迅速发展 , 虫生真菌的分子生物学研究方面也不甘落后 , 目前已经纯化的蛋白酶类约20 余种 , 其 ( ) 相应基因种类也相继得到克隆测序 表 1 , 主要是与毒力相关的因子 , 其中研究比较 成熟的是金龟子绿僵菌类枯草杆菌蛋白酶类及其相关基因[2 ] , 现在马里兰大学 St L eger 研究组正进行金龟子绿僵菌的基因组测序 , 随着对 cDNA 序列功能分析的不断进行 , 将有大量的基因被陆续报道 。这些研究的目的是为了解决虫生真菌杀虫速率缓慢的弱 点, 以期从分子生物学水平上提高菌株的杀虫毒力 , 在最大程度及范围上发挥虫生真 菌在害虫控制上的优势及潜力 。 1 　蛋白酶纯化 目前所分离 、纯化的酶类主要是虫生真菌入侵昆虫体壁过程中所产生的蛋白酶类 , 因而在不同程度上表现与菌株毒力相关 。St L eger 由巨大蜚蠊 ( Blaverus gigantesu) 体壁 离体诱导试验表明, 金龟子绿僵菌孢子萌发过程至少有 42 种蛋白产生 , 其中主要为酸 ( ) 性蛋白酶类 p I 42～56 , 这些酶类一般均由结构不同的同工酶组成为一个酶系 , 如 金龟子绿僵菌 PR1A 及 PR1B 理化特性相近 , 但氨基酸序列只有 53 %的同源性 ; PR2 已 知的2 个同工酶的同源性为 56 %[3 ,4 ] 。另外就酶活性而言 , PR2 、PR4 、TRY1 也可认为 ( )