分子生物学-轻化.docVIP

分子生物学：从分子水平上研究生命本质的边缘学科 基因重组技术：又叫基因工程，将DNA片段按照人们的设计固定的链接起来，在特定的受体细胞中同载体共同复制并表达，产生影响受体细胞的新的遗传特性 理论上的三大发现：1。40年代，发现了生物遗产物质的化学本质是DNA 2，50年代，提出了DNA分子的双螺旋结构，搞清楚了生物遗传的分子机制 3,60年代，发现了DNA的遗传方式DNA—RNA—蛋白质 技术上的四大发明：基因剪刀—限制性内切酶，基因针线—DNA连接酶，基因车子—载体，逆转录酶 分子生物学发展趋势：1功能基因组学2蛋白质组学3生物信息学 核酸的化学组成成分：核酸—核苷酸：核苷—碱基，戊糖+磷酸 DNA的一级结构：四种核苷酸按照一定的顺序排列，在3,5磷酸而酯键的作用下合成多核苷酸，用于核苷酸之间的差异仅仅是碱基的不同，又叫碱基序列 DNA的二级结构：蛋白质的α-螺旋结构，DNA的反平行双螺旋结构。 DNA的三级结构：在一，二级结构的基础上，多聚核苷酸主链上的卷曲，在一定意义上说，是DNA分子双螺旋基础上的卷曲 溴化乙锭：通过嵌入到配对碱基之间与DNA分子结合的方式，导致DNA双螺旋的局部结旋。 从DNA到染色体：DNA压缩7倍核小体 压缩6倍螺线 管压缩40倍超螺线管 压缩5被染色体 DNA的粗提取：1制备鸡血细胞液：加柠檬酸，抗凝血2提取鸡血细胞核物质：20毫升水。加速血细胞破裂3溶解细胞内的DNA；2mol/l 氯化钠溶液40毫升，溶解DNA 4析出含DNA的粘稠物：蒸馏水，使DNA最大限度的析出5滤去DNA粘稠物：使DNA得粘稠物被留在纱布上 6将DNA的粘稠物再溶解：2mol/l 氯化钠溶液20毫升，使DNA尽可能多的溶解在溶液中7过滤含DNA的氯化钠溶液：除去含DNA的滤液中的杂质8提取含有杂质较少的物质：冷却的95%的酒精50毫升，提取DNA 9鉴定A (1)向试管中加入0.015mol/l的氯化钠溶液5毫升 ( 2)加入DNA ( 3),4毫升二苯胺试剂 B (1)向试管中加入0.015mol/l的氯化钠溶液 ( 2) 4毫升二苯胺试剂 A出现蓝色B无变化 基因：从分子生物学的角度，是核酸中储存遗传信息的遗传单位，是储存有功能的蛋白质。多肽链和RNA序列信息，和表达这些信息所必须的全部的核苷酸序列 表型和基因型：某一机体可以观察到的特征称为表型。与表型相应的基因组成称为基因型 基因组：是在细胞或者生物中一套完整的单倍体遗传物质的总和 1基因组大小：一种生物单倍体基因组DNA的总量。C值大小与生物遗传复杂性是否成正比2c值矛盾：生物基因组的大小同生物在进化上所处低位的高低无关。3基因可分为结构基因和调控基因。4结构基因;决定某种多肽链氨基酸种类和排列顺序的基因 *原核基因组结构与特点：1基因组通常仅由一条环状双链DNA分子组成。2基因组中只有一个复制起点。3具有操纵子结构（多顺反子：是指数功能相关的结构基因串联在一起，构成信息区，连同其上游的调控区及其下游的转录终止信号构成的基因表达单位）4结构基因无重叠现象，基因组中任何一段DNA都不会用于编码。5基因序列是连续的，无内含子结构。6编码区和非编码区在基因组中约占50%。7基因组中的复制序列很少。8具有编码同工酶的基因。9细菌基因组中存在可移动的DNA序列，包括插入序列和转座子 *真核基因组结构和特点：1真核生物基因组DNA与蛋白质结合形成染色体，储存于细胞核内，除配子细胞外，体细胞内的基因的基因组是双份的（双倍体）2真核细胞基因转录产物为单顺反子，一个结构基因经过转录和翻译生成一个mRNA分子和一条多肽链3基因组中不编码的区域多于编码区域： 断裂基因：在真核类细胞基因组中，编码序列被许多称为内含子的非编码序列分割成几段 内含子：真核生物的结构基因是不连续的，编码序列被非编码序列打断，在编码序列之间的序列 外显子：编码序列被称为外显子 顺式调控元件：指与结构基因表达调控相关，能被基因调控蛋白质特异性之别和结合的DNA序列，包括启动子，终止子，上游启动子元件 反应元件 增强子 加尾信号 启动子：促进DNA转录的DNA序列是DNA分子可以与RNA聚合酶特异性识别结合并使之转录的部位 4存在重复序列，重复次数可达百万次以上 据根据出现的频率不同可将DNA序列分为3类：1高度重复序列在基因组中的重复次数大于105 2中度重复序列在基因组中的重复次数为10—105 3单拷贝序列在基因组之中出现一次或少数1-10 5大部分基因含有内含子因此基因是不连续的 6基因组远远大于原核生物的基因组，具有许多复制起点而每个复制子的长度较小 DNA复制：亲代双链DNA分子在DNA酶的作用下，分别以各单链DNA分子为模板，聚合与自身碱基可以互补配对的游离的DNTP，合成两条